導(dǎo)語：如何才能寫好一篇姊妹情深，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

    在介紹詩集的靈魂與韻致時(shí)，朱自清先生采用了這樣的詩化語言:“在朦朧的他兒時(shí)的夢(mèng)里、有像紅蠟燭的光一跳一跳的，便是愛。”那充滿夢(mèng)幻色彩的迷人的夜:“他將像小燕子一樣，沉浸在夏夜夢(mèng)里，便是分明的自白。在他的‘憶的路’上，在他的‘兒時(shí)’里，滿布著黃昏與夜的顏色。夏夜是銀白色的，帶著桅子花兒的香;秋夜是鐵灰色的，有青色的油盞火的微芒;春夜最熱鬧的是上燈節(jié)，有各色燈的輝煌，小燭的搖蕩;冬夜是數(shù)除夕了，紅的，綠的，淡黃的顏色，便是年的衣裳，……”朱自清先生以清新爽快的筆調(diào)，強(qiáng)調(diào)寫出了俞平伯兒時(shí)生活中那充滿夢(mèng)幻色彩的迷人的夜，讓人不用讀原詩，便會(huì)感受到一顆天真爛漫的童心，感受到一種充滿了溫馨稚趣的愛的生活氛圍。

    如果說，豐子愷先生的畫給俞平伯(憶)中的“薄薄的影”“著了顏色”，使詩的影子顯得“格外分明”，使“夢(mèng)的顏色加添了夢(mèng)的滋味”，那么朱自清先生的(跋)則為俞平伯的(憶)譜上了清亮悠揚(yáng)的曲，自然巧妙地征服了讀者的心，為(憶)贏得了廣大的“聽眾”?！陡杪暋纷屓瞬唤肫鹆恕坝嘁衾@梁三日不絕”的美譽(yù)，但細(xì)細(xì)品來仍覺模糊不甚清晰，至少離身心較遠(yuǎn)。而“昨晚中西音樂歌舞大會(huì)里‘中西絲竹和唱’的三曲清歌，真令我神迷心醉了。”因?yàn)樗扒逅笔强梢杂|摸到的。歌聲如“一個(gè)暮春的早晨”，爽人心脾。音樂如“霏霏的毛雨默然灑在我臉上、引起潤澤、輕松的感覺?！彼氖指杏X到了“新鮮的微風(fēng)吹動(dòng)”，他的腳感覺到了“經(jīng)了那細(xì)雨”，變得“滑膩可愛”的雨道?！拔⒂晖低迪慈チ恕被▓@里做著“清夢(mèng)”的群花的塵垢，“她們的甜軟的光澤便自煥發(fā)了”，有“恬靜的紅”、“冷落的紫”、“苦笑的白與綠”。音樂如“涓涓的東風(fēng)只吹來一縷縷餓了似的花香”，吹來了“潮濕的草叢的氣息和泥土的滋味”，還有“清新的蒸氣”。這些樸素、淡雅、清爽的語言，表達(dá)了富有朝氣的青年詩人的內(nèi)心世界。

    (阿河)與(女人)等散文中，都有關(guān)于人物的描寫，同樣給人以清爽、清秀的感覺。

    阿河“有一套和云霞比美，水月爭(zhēng)靈的曲線?！彼膬深a“白中透著微紅，潤澤如玉”;她的皮膚“嫩得可以掐出水來”;她的眼睛“像一雙小燕子;老是在淞淞的春水上打著圈兒”;她的笑臉“像一朵桃花.”，微笑時(shí)便是盛開的時(shí)候;她的頭發(fā)如純絲，柔軟而光滑。

    在(女人)中，作者看到了“在薄薄的香澤當(dāng)中，一群白上衣，黑背心，黑裙子的女人，默默的，遠(yuǎn)遠(yuǎn)的走進(jìn)來了。”仿佛看見了“安琪兒”;“在暮靄四合”的湖上、艇里“坐著八九個(gè)雪白雪白的白衣的姑娘，湖風(fēng)舞弄著她們的衣裳，便成一片渾然的白?！彼齻兂闪恕昂瘛?“淡月微云之下”的橋上，相依的十來個(gè)姑娘，“朦膝朧朧的與月一齊白著”，她們是月姊兒的化身。

篇2

每年1月1日在美國南加州帕薩迪納市舉行的玫瑰花車游行，是美國有著悠久歷史的著名大眾性元旦慶賀盛典。2008年元旦，在眾多玫瑰裝點(diǎn)的花車當(dāng)中，以2008年北京奧運(yùn)會(huì)為主題的花車格外美麗，激起了游行線路兩側(cè)觀眾們一陣陣熱烈的掌聲和歡呼聲。

在現(xiàn)場(chǎng)觀眾當(dāng)中，一群頭戴印有奧運(yùn)標(biāo)志帽子的中國人分外搶眼，他們就是由200多名來自加州大學(xué)洛杉磯分校，南加州大學(xué)，加州理工學(xué)院等南加州各高校的留學(xué)生和訪問學(xué)者組成的美西南中國學(xué)生學(xué)者聯(lián)誼會(huì)主席聯(lián)席會(huì)“奧運(yùn)花車喝彩團(tuán)”。

當(dāng)奧運(yùn)花車經(jīng)過“喝彩團(tuán)”的時(shí)候，整個(gè)觀眾區(qū)沸騰了!中國學(xué)生學(xué)者們手揮奧運(yùn)標(biāo)語和旗幟，齊聲呼喊著“北京!奧運(yùn)!”“同一個(gè)世界、同一個(gè)夢(mèng)想!”同學(xué)們手中小旗上的袖珍福娃，仿佛為花車上大大的福娃跳起歡快的舞蹈?；ㄜ囌胺降谋本W運(yùn)會(huì)主題口號(hào)“同一個(gè)世界、同一個(gè)夢(mèng)想”，在同學(xué)們歡樂的喊聲中顯得愈加意味深長。觀眾區(qū)內(nèi)的許多美國朋友也被這熱烈的氣氛感染，一起高呼“北京!奧林匹克!奧林匹克!北京!”花車放慢了速度讓道路兩邊的觀眾盡情欣賞奧運(yùn)花車行進(jìn)隊(duì)伍中精彩的雜技，舞蹈表演，掌聲、歡呼聲也變得更為熱烈。可愛的福娃、歡騰的人群，成了花車游行現(xiàn)場(chǎng)一道激動(dòng)人心的風(fēng)景。

這激動(dòng)人心的風(fēng)景里，包含著海外學(xué)子對(duì)北京奧運(yùn)的深情。想看花車游行的人很多較高的看臺(tái)有十幾層座位，而為了能站在路邊的位置，在最近的距離為花車喝彩助威，現(xiàn)場(chǎng)的多數(shù)同學(xué)整夜未眠，聯(lián)席會(huì)的主要骨干甚至從前一天早晨開始就守在路邊。中國留學(xué)生們?nèi)宄扇壕墼谝黄?，有的點(diǎn)上應(yīng)急燈打撲克有的借著路燈做起了小游戲。帕薩迪納的冬夜寒氣逼人但是，大家對(duì)奧運(yùn)的熱情卻不能不讓人心中感覺到陣陣暖意。一位70多歲的中國學(xué)者因年紀(jì)太大，實(shí)在熬不了一夜但還是天沒亮就早早出了家門，坐上公共汽車，輾轉(zhuǎn)10余公里，愣是在奧運(yùn)花車到達(dá)以前加入了“喝彩團(tuán)”。

這次為奧運(yùn)花車的喝彩活動(dòng)，是美西南中國學(xué)生學(xué)者聯(lián)誼會(huì)主席聯(lián)席會(huì)迎奧運(yùn)系列活動(dòng)里的重頭戲。包括留學(xué)生足球賽，羽毛球賽等在內(nèi)的一系列迎奧運(yùn)活動(dòng)的成功舉行，體現(xiàn)了美西南地區(qū)(含南加州、亞利桑那州、新墨西哥州，夏威夷州)廣大中國學(xué)生學(xué)者對(duì)北京奧運(yùn)會(huì)的無限熱情與良好祝愿――今年玫瑰花車游行的主題是“通向世界慶典的護(hù)照”，我們也衷心祝愿北京奧運(yùn)會(huì)這一世界慶典圓滿成功!

篇3

因在合資企業(yè)工作的關(guān)系，經(jīng)常到亞歐和北美一些國家出差。行走于各個(gè)國家期間，給我留下深刻印象的，除了當(dāng)?shù)仂届坏淖匀伙L(fēng)光和帶著歷史印痕的名勝古跡外，還有各個(gè)國家的人文風(fēng)尚，最近一次美國之行中遇到的一件事就令我至今難忘。

不久前，單位研發(fā)工作中遇到一些棘手問題一直難以破解，領(lǐng)導(dǎo)派我到美國一家有合作關(guān)系的公司尋求幫助。于是我漂洋過海來到這家公司設(shè)在洛杉磯的總部，負(fù)責(zé)技術(shù)工作的經(jīng)理詹姆斯非常熱情地接待了我，聽完情況介紹，他立即安排幾個(gè)相關(guān)部門的人員幫我解決問題，同時(shí)，為了方便我與大家溝通，詹姆斯專門安排了一位叫達(dá)尼埃爾的年輕人專門負(fù)責(zé)我與這幾個(gè)部門的聯(lián)絡(luò)以及日常生活。

達(dá)尼埃爾是3年前大學(xué)畢業(yè)應(yīng)聘到這家公司的，接觸中我很快發(fā)現(xiàn)，他是一個(gè)性格大方開朗，很有工作能力的年輕人，幾天下來我們相處得非常愉快。一周后，我所帶的難題大部分已圓滿解決，只剩下一個(gè)問題的技術(shù)指標(biāo)需要到芝加哥一家權(quán)威檢測(cè)機(jī)構(gòu)再做些檢測(cè)。這樣，我便在達(dá)尼埃爾的陪同下，來到了位于密歇根湖畔的美國名城芝加哥。在芝加哥期間，有了達(dá)尼埃爾的協(xié)助，一切進(jìn)行得十分順利。

達(dá)尼埃爾也是第一次來芝加哥，多日接觸中，我了解到他非常喜歡繪畫和雕塑，而正好“芝加哥藝術(shù)博物館”是美國三大藝術(shù)博物館之一，收藏有世界五大洲的30多萬件藝術(shù)珍品，其中包括凡高、莫奈等世界級(jí)大師的杰作。于是在等待檢測(cè)結(jié)果的時(shí)候我建議：“達(dá)尼埃爾，今天下午正好有時(shí)間，我們?nèi)⒂^一下芝加哥藝術(shù)博物館吧！”達(dá)尼埃爾一聽立即高興起來：“好?。∥覍?duì)這座藝術(shù)博物館可是向往已久啦！”

吃完中午飯，我們來到位于芝加哥市中心的藝術(shù)博物館，到了售票處，看到上面標(biāo)明門票的價(jià)格：成人18美元。我迅速走上前，打開錢包拿出40美元遞給售票員，說要買兩張門票。誰知就在這時(shí)，站在一旁的達(dá)尼埃爾一把將錢奪了過去，我先是一愣，轉(zhuǎn)而即明白了達(dá)尼埃爾的用意，立即邊往回奪錢，邊說：“達(dá)尼埃爾，你這是干嗎呀！門票由我來買，你別這樣！”可達(dá)尼埃爾像是沒聽見一樣，一聲不吭地從剛剛奪下的兩張20美元中拿出一張塞到我手里，然后才一臉嚴(yán)肅地對(duì)我說：“參觀藝術(shù)博物館，是我的個(gè)人消費(fèi)，門票必須我自己買！”話語之堅(jiān)定，毫無回旋余地。大庭廣眾之下，看著達(dá)尼埃爾不置可否的神情，我只好由他去。看我不再爭(zhēng)執(zhí)，達(dá)尼埃爾臉上露出笑容，自己買了門票。

一下午的參觀，達(dá)尼埃爾看得興致勃勃，參觀結(jié)束時(shí)已是傍晚時(shí)分。我們?cè)谕饷娉酝觑埢氐骄频?，聊了一通參觀的感受后，我拿出18美元遞給達(dá)尼埃爾，真誠地對(duì)他說：“今天的參觀是我提出的，幫你買門票，是為了感謝這些天來你在各方面給了我許多幫助，這區(qū)區(qū)十幾塊錢請(qǐng)你務(wù)必收下！”達(dá)尼埃爾看了我一眼，非常認(rèn)真地回答：“協(xié)助你完成任務(wù)，是我的工作，分內(nèi)的事，你能滿意就是對(duì)我最好的肯定。參觀藝術(shù)博物館，純屬工作之外的事，因此這錢我不能收！” 我一聽有點(diǎn)急了：“達(dá)尼埃爾，我這也是代表我們公司表達(dá)一點(diǎn)心意……”我的話還沒說完，達(dá)尼埃爾便做了個(gè)籃球場(chǎng)上暫停的手勢(shì)，攔住了我的話頭：“不論你是個(gè)人意思，還是公司的心意，這錢我都不能收，如果讓你花錢買門票，滿足我個(gè)人的愛好，那不成了借工作之便徇私了嗎？”我一聽馬上說：“問題沒那么嚴(yán)重吧！”“怎么不嚴(yán)重，這絕不是多少錢的事，而是涉及到一個(gè)人做人處世標(biāo)準(zhǔn)的原則問題！”

篇4

一、《柏子》中人物展現(xiàn)的獨(dú)特“生命形式”

《柏子》講述的是一個(gè)水手和的故事，水手終年在海上漂泊，但每月都會(huì)花完自己用性命換來的錢，去和自己相好的見上一面，在見面過程中他們并沒有感到生活的不易以及這種生活的荒謬，他們反而感到非常的滿足。水手認(rèn)為能夠在保證自己基本生活的前提下，花光所有的錢和會(huì)一次面就是最幸福的事！這部作品的故事相當(dāng)?shù)睾唵危衷谏习吨蠛蜁?huì)一次面，之后又返回船上，這樣就完成了他們之間的一次約定，這件事在當(dāng)時(shí)那個(gè)年代是一件非常平常的事。但是從這個(gè)故事本身進(jìn)行分析，我們不難看出，即使是生活在社會(huì)最底層的湘西人民，他們也始終以一種最本真的形式生活著。雖然故事中的主人公只是水手和，但是他們之間的感情卻是發(fā)自內(nèi)心的，我們給他們同情和憐憫，因?yàn)樗麄兏械降氖切腋：蜐M足。故事中展現(xiàn)出來的生存滿足和本望，就是湘西底層人民一種獨(dú)特的“生命形式”。

柏子是一個(gè)出身低微的水手，由于社會(huì)對(duì)他狠狠的壓榨，他只能冒著生命危險(xiǎn)去工作，這樣才能保證自己的基本生活，不然隨時(shí)都有餓死街頭的可能性。在工作過程中，唱歌是他最好的發(fā)泄方式?！栋刈印分械氖窍嫖魑幕械牧硗庖环N“生命形式”，她們過著屈辱的生活，但是她們的人性并沒有被這種生活所吞沒。文中的柏子把辛辛苦苦掙來的錢留下生活的必需，全部都花費(fèi)在身上，我們?cè)诎刈拥纳砩险也坏降赖碌募湘i，只有最本真的野性。也把所有的感情都傾注在柏子身上，關(guān)心著柏子，在她身上我們找不到那些的低俗趣味。作者沒有對(duì)柏子和這兩種“生命形式”有任何的鄙夷之情，而是對(duì)他們?cè)趬阂值纳?，?jiān)持著生命的本能倔強(qiáng)地生活著帶有一定的贊美之情。柏子和是人性最本真、最自在的展現(xiàn)，這種特殊的“生命形式”也只有在湘西文化中才能找到。在閱讀《柏子》的過程中，我們雖然可以明顯地感到柏子和生命的壓抑，但是也可以看出在他們壓抑的生命下人性的張揚(yáng)，他們大膽、自然、沒有絲毫心機(jī)地保持著這種讓人又悲又贊的“畸形”戀愛，這種張揚(yáng)的方式似乎超脫了道德的限制，是人追求自由生命的最高形式，實(shí)現(xiàn)了人性和“無道德”最完美的統(tǒng)一。

二、《柏子》中冷漠與狂歡并存的敘事風(fēng)格

雖然作者在《柏子》中跟隨著自己非理性的思想，毅然拿起人性的大刀，掙脫了傳統(tǒng)的禮教束縛，借助于一種狂歡的方式來展示一個(gè)叛逆者的痛苦。但是這種方式同時(shí)也展現(xiàn)出了社會(huì)底層人民所遭受的冷漠以及他們生活的不易。我們可以明顯地看出，在那個(gè)吊腳樓中狂歡的“柏子”們，沒有對(duì)未來抱有任何希望，“他們把自己沉浸在這歡樂空氣中，忘記了世界，也忘記了自己的過去與未來”。水手常年漂泊在外，岸對(duì)于他們來說就是一個(gè)不會(huì)動(dòng)的船，雖然他們也希望能夠永遠(yuǎn)留在岸上，過著平穩(wěn)真實(shí)的生活，但是他們也十分明白這種真實(shí)和平穩(wěn)都是以精神的堅(jiān)實(shí)作為前提條件的。所以他們把吊腳樓當(dāng)成是自己岸上的家所在，把自己的軀殼短暫地寄放在那里，或許也只有在那里，他們才能真正感受到人性的尊嚴(yán)，體會(huì)到自己生命的自由，才會(huì)有一種靈魂的存在感。在狂歡中，他們對(duì)傳統(tǒng)社會(huì)道德進(jìn)行了無拘無束的顛覆，重新構(gòu)建出了自己的理想，并對(duì)此進(jìn)行了實(shí)現(xiàn)。在狂歡之后，他們用最粗俗的方式顯示著自己的占有權(quán)，同時(shí)這也是對(duì)獨(dú)占性的顛覆。兩個(gè)生活在社會(huì)最底層的人們，掙脫世俗的束縛，以自己特有的狂歡方式對(duì)世俗觀念進(jìn)行著挑戰(zhàn)，對(duì)傳統(tǒng)的生活方式進(jìn)行著顛覆，雖然說這是人性最本真的狂歡，但是在這之中卻蘊(yùn)涵著一定程度上的不得已。

這些“柏子”們?cè)陔x去的時(shí)候，頭頂著大雨，對(duì)于自己花光的錢做了什么，得到了什么，都不去想，他們只是把曾經(jīng)用手撫摸那女人的身體當(dāng)成是以后的所有快樂。這些“柏子”們把自己永遠(yuǎn)地束縛在自己的夢(mèng)中，遠(yuǎn)離塵世的羈絆，掙脫現(xiàn)實(shí)的束縛，就像是把自己永遠(yuǎn)地固封在了一個(gè)虛幻的繭里，過著屬于自己的狂歡日子，但從中我們也會(huì)不自覺地看到這些“柏子”們的可憐之處，看到這個(gè)世界的冷漠，看到他們的靈魂在苦苦掙扎下，最終做出的悲涼選擇。

作者借助于這種敘事風(fēng)格，也體現(xiàn)了當(dāng)時(shí)那個(gè)時(shí)代下知識(shí)分子的脆弱靈魂。當(dāng)時(shí)正是“五四”運(yùn)動(dòng)的大潮退去之時(shí)，中國的新文化陣營面臨著崩解的局面，有的知識(shí)分子移居國外，有的開始韜光養(yǎng)晦，有的退隱林泉。沈從文在1928年從北京逃到了上海，但是上海是冒險(xiǎn)家和投機(jī)者的樂園，不是一個(gè)可以放置自己靈魂的凈土，最后沈從文不得不把眼光投向了自己的家鄉(xiāng)――湘西。只有在這里他才能感受到一份安靜；只有在這里他才能找到他夢(mèng)想中的那份古樸和原始；只有在這里他才能把外界的一切喧囂當(dāng)成不存在；只有在這里才能讓他過著冷漠與狂歡并存的生活，可是這又何嘗不是當(dāng)時(shí)知識(shí)分子追求的最終結(jié)果呢？

三、《柏子》中蘊(yùn)涵的人性哲學(xué)

湘西是沈從文最終的選擇，他深深地愛著自己的家鄉(xiāng)，我們從沈從文的多部作品中，都可以明顯地看到作者的內(nèi)在精神是和作品中的思想一致的，都是呼吁人性的回歸。但是作者卻始終有意地避開社會(huì)道德，而是主要從生命個(gè)體上去尋找人性的存在，從這一方面來說，沈從文更像是一個(gè)人道主義者。水手和的故事在現(xiàn)代文明看來，是有違社會(huì)道德的，但是在湘西這片神奇的土地上，本身就是沒有道德的，這些故事只是發(fā)生在湘西一件非常普通的故事，是人性最本真的呈現(xiàn)。沈從文筆下的湘西文化中蘊(yùn)涵著獨(dú)特的人性哲學(xué)，作者始終不肯觸及社會(huì)道德的框架，始終不讓讀者感到有一種道德環(huán)境的距離感以及排斥感。我們?cè)谧x老舍先生的《駱駝祥子》的時(shí)候，總會(huì)想著借助于道德的標(biāo)準(zhǔn)去衡量其價(jià)值，但是在讀《柏子》的時(shí)候，我們始終不想以一種道德的標(biāo)準(zhǔn)去對(duì)主人公的行為進(jìn)行束縛，總想著給人性一個(gè)最本性的存在。這可以說是人們?cè)趻昝撋鐣?huì)道德束縛之后所產(chǎn)生的巨大爆發(fā)力，也就是人們野性的回歸。在這里也不禁引起了我們對(duì)道德處境的疑慮，如果真的是這種人性哲學(xué)中的“人性”去主宰一切，那么“人性”將是人們行為的最高標(biāo)準(zhǔn)。我們從沈從文的作品中不難發(fā)現(xiàn)，他所描述的湘西生活中的人并不是自由自在的，現(xiàn)代社會(huì)的文明也在逐漸對(duì)傳統(tǒng)文化進(jìn)行侵蝕，這里也存在著一定的災(zāi)難，如饑餓、血淚、壓迫、死亡等。但是作者始終沒有對(duì)這些悲劇進(jìn)行直接描寫，而是將其上升到人性的高度，把自己的眼光只放在那些承受著苦難又頑強(qiáng)地生存下來的社會(huì)底層人們的身上，發(fā)掘他們?nèi)诵宰畋菊娴谋憩F(xiàn)，拋開苦難的束縛，這樣不管是從表現(xiàn)對(duì)象本身來看，還是從其表達(dá)主題來看，都和“人性”這一最高評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)相符合。同時(shí)，這種人性的存在也始終在人們心靈深處隱藏著，并不時(shí)地對(duì)人們的生活方式產(chǎn)生著影響。作者通過這種不斷地對(duì)社會(huì)道德的束縛進(jìn)行掙脫，從而回歸到人的本真上來，為讀者重塑了個(gè)人的主體性和一種理想化的人生模式。

篇5

1、肉沒合上勁或瘦肉太多。

2、沒兌魚紅或者生粉兌少了。

制作清汆丸子的要點(diǎn)如下：

1、選肉方面。肉要7分瘦，3分肥。

2、1斤肉要兌2-3兩魚紅。

3、合肉丸要先撒鹽，撒了鹽后就開始順著一個(gè)方向合，等肉起勁，然后再兌水，繼續(xù)合。這樣反復(fù)幾次，就可以往里面放雞蛋，再繼續(xù)合，合均勻后，就可以加生粉。

篇6

兄妹之間永牽絆

醫(yī)院里：

空中彌漫著刺鼻的消炎水。最普通的的一間病房里，陽光灑滿整個(gè)房間。無形的風(fēng)把白色窗簾上下飛揚(yáng)，像一場(chǎng)早來的葬禮。窗戶旁有一張小床，床上坐著一個(gè)骨瘦如柴的小女孩，大約只有八九歲。虛弱的仿佛一碰就要散架，臉上沒有一點(diǎn)血色，他看著窗外的風(fēng)景，心里充滿向往。

哥，你說我還會(huì)好起來嗎？她吃力的張開嘴唇問自己的哥哥。

正在收拾餐具的少年，聽見這虛弱的聲音，心狠狠的的揪了一下。他放下手中的飯盒，轉(zhuǎn)身看自己的妹妹。女孩正在伸手捉被風(fēng)吹落的蒲公英，開心地笑著。望著妹妹的笑臉，眼圈微微泛紅，他好久沒看到妹妹是那樣開心的笑了。

少年沙啞著嗓子說：欣欣一定會(huì)好起來的”少年也好累好累。少年坐在床上摟著欣欣換了好多表情，終于努力扯起一絲微。

太好了，哥哥我太高興了。欣欣也勉強(qiáng)的笑了一下，她怎么不知道自己的身體狀況呢。哥，再帶我去一次游樂園吧。

好，等欣欣好了我們?cè)谌?。說完這句話，淚水已奔涌而出了。少年清楚記得，欣欣住院前，他第一次帶欣欣去游樂園，欣欣當(dāng)時(shí)的喜悅表情都印在少年腦海。也可能也是最后一次了。

哥我想睡覺。他不想回憶太美好的記憶。越美好越讓她心痛。你唱歌哄我睡吧，我們家的歌。

少年沙啞著唱完欣欣最愛的歌。

篇7

關(guān)鍵詞： 寫字教學(xué) 審美情操 教學(xué)策略

《九年義務(wù)教育全日制小學(xué)寫字教學(xué)指導(dǎo)綱要》指出“寫字是小學(xué)生應(yīng)具備的一項(xiàng)重要的語文基本功，寫字教學(xué)是小學(xué)語文教學(xué)的重要組成部分。搞好寫字教學(xué)，對(duì)學(xué)生今后的工作有重要作用”。教育部的一位負(fù)責(zé)人說：“規(guī)范、端正、整潔地書寫漢字，是學(xué)生培養(yǎng)終身學(xué)習(xí)能力的基礎(chǔ)。養(yǎng)成良好的寫字習(xí)慣，具備熟練的寫字技能，具有初步的書法欣賞能力，是現(xiàn)代中國公民應(yīng)有的基本素養(yǎng)。”所以，無論是從實(shí)用的角度，還是從培養(yǎng)綜合素質(zhì)角度考慮，寫好字都大有裨益。但近年來學(xué)生寫字狀況并不樂觀。之所以如此，有三個(gè)原因：一是信息技術(shù)普及使小學(xué)生學(xué)習(xí)步入了少紙、無紙時(shí)代?，F(xiàn)在的孩子大都喜歡電腦輸入，快捷簡便，至于用手書寫，他們都嫌麻煩。二是觀念上的忽視。不少學(xué)校老師認(rèn)為教學(xué)水平主要體現(xiàn)在學(xué)生成績上，學(xué)生寫字好壞與成績、升學(xué)無關(guān)，占用課時(shí)練習(xí)寫字不值得，于是，寫字教學(xué)成了被遺忘的角落。三是應(yīng)試教育帶來的鋪天蓋地的題海壓得學(xué)生根本沒有時(shí)間練習(xí)寫字，認(rèn)認(rèn)真真地寫好字，只圖完成任務(wù)，于是字就越寫越亂。所以，教師在教學(xué)中，不妨像語文教育專家說的，在每一節(jié)教學(xué)中，留出幾分鐘時(shí)間，指導(dǎo)寫字，讓學(xué)生把字寫端正、整齊、漂亮。

實(shí)踐證明，要增強(qiáng)寫字教學(xué)的效果，必須采取行之有效的教學(xué)方法。在多年的寫字教學(xué)中，我嘗試了觀察、示范、臨摹、比較、鑒賞“五步曲”的做法，收到了較好的效果。

一、仔細(xì)觀察

在寫字之前，老師指導(dǎo)學(xué)生削好鉛筆，放好作業(yè)本，端正坐姿，指導(dǎo)執(zhí)筆方法。然后讓學(xué)生靜心觀察生字在田字格中的位置，弄清字的筆畫順序，間架結(jié)構(gòu)，以及每個(gè)筆畫所在的位置，找個(gè)性、抓特點(diǎn)、尋規(guī)律，使生字的每筆每畫都印在學(xué)生的腦海里。如在寫“豐”字前，先引導(dǎo)學(xué)生仔細(xì)觀察字形，找出“豐”字的特點(diǎn)和關(guān)鍵筆畫。“豐”字中筆畫最多的是橫畫，且這些橫畫也不盡相同。三橫中第三橫最長，它略低于橫中線，寫時(shí)稍有傾斜，左低右高。其他兩橫短，橫與橫之間的間隔要基本相等。只要掌握了這幾點(diǎn)，寫好這個(gè)字就不是太難的事。

二、親筆示范

在寫字教學(xué)中，“最好也是最省力的辦法，則是親筆示范給學(xué)生看”。這種示范在低段寫字教學(xué)中顯得尤為重要，它可以使學(xué)生從感性認(rèn)識(shí)入手，但如果操作不當(dāng)，就會(huì)流于形式而不見實(shí)效。比如，教學(xué)“聽、唱”這兩個(gè)生字時(shí)，問學(xué)生：“這兩個(gè)字有什么共同點(diǎn)？”然后引導(dǎo)學(xué)生發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)字的“口”字旁在整個(gè)字中的位置是在左上邊，接著讓學(xué)生觀察教師的范寫，引導(dǎo)他們分析教師所寫的范字，驗(yàn)證理論知識(shí)，幫助他們進(jìn)一步理解書寫技法和規(guī)律。

三、用心臨摹

臨摹是練字的基本途徑。要讓學(xué)生在觀察的基礎(chǔ)上，認(rèn)真分析各字的結(jié)構(gòu)，做到臨與摹有機(jī)結(jié)合，使學(xué)生逐步掌握寫字的技巧。每個(gè)字，我只要求學(xué)生寫三遍，求質(zhì)量，不求數(shù)量，讓學(xué)生認(rèn)真練習(xí)，努力寫好，如“寄”字，摹寫前先指導(dǎo)學(xué)生觀察分析結(jié)構(gòu)及組成部件。明確寫時(shí)“寶蓋寬懷含大，可字寬橫相承”，然后通過摹寫，掌握其在田字格中的位置，以便在下一個(gè)田字格中準(zhǔn)確、熟練地臨寫。這樣一臨一寫，摹臨結(jié)合，反復(fù)訓(xùn)練，寫字水平自然不斷提高。

四、學(xué)會(huì)比較

在寫字教學(xué)中，教師要善于引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行比較。課堂上，我常常將字寫得漂亮的作品放在展板上讓學(xué)生與自己的作品比較。讓學(xué)生在比較中捕捉特點(diǎn)，思考分析，找出差距，發(fā)揚(yáng)優(yōu)點(diǎn)，克服缺點(diǎn)，取長補(bǔ)短，逐步提高寫字水平。同時(shí)，我還讓學(xué)生經(jīng)常把自己在不同階段寫的字加以比較，找出進(jìn)步快的地方，不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，在比較中增強(qiáng)寫好字的信心。每天進(jìn)步一小步，時(shí)間長了，就是一大步。

五、競(jìng)賽創(chuàng)新

競(jìng)賽不但能調(diào)動(dòng)學(xué)生練字的積極性，還能培養(yǎng)學(xué)生的競(jìng)爭(zhēng)意識(shí)及同學(xué)之間互相合作的集體意識(shí)。

1.作業(yè)星級(jí)制度。每次作業(yè)面批時(shí)，我都讓學(xué)生把寫的字與范字進(jìn)行比較，與上次作業(yè)進(jìn)行比較，并給出相應(yīng)等級(jí)。一個(gè)單元進(jìn)行一次小結(jié)性評(píng)比，得8次優(yōu)的學(xué)生可以拿到一朵小紅花，學(xué)期末評(píng)出星級(jí)作業(yè)，并給予獎(jiǎng)勵(lì)。

2.小組競(jìng)賽。每節(jié)寫字課上，以小組為單位，進(jìn)行寫字比賽（包括寫字的姿勢(shì)）。獲勝的小組每人得到一朵“小紅花”。

3.個(gè)人競(jìng)賽。定期舉辦寫字比賽，從中挑選出優(yōu)秀的作品張貼在學(xué)習(xí)園地中，貼上“小紅花”。讓學(xué)生觀看欣賞，激發(fā)他們濃厚的寫字興趣，培養(yǎng)他們的創(chuàng)新意識(shí)。另外，鼓勵(lì)學(xué)生積極參加校內(nèi)外組織的各項(xiàng)書法競(jìng)賽，讓學(xué)生看到自己的進(jìn)步，增強(qiáng)自信心。

總之，寫字可以磨煉人的意志，陶冶人的情操，增強(qiáng)人的審美能力。在教學(xué)過程中，教師應(yīng)該因材施教，加強(qiáng)寫字方面的訓(xùn)練，讓學(xué)生在寫字活動(dòng)中感受美、創(chuàng)造美?！氨鶅鋈撸且蝗罩?。只要持之以恒，寫字教學(xué)一定會(huì)獲得成功，學(xué)生也一定會(huì)寫出一手漂亮的字。

參考文獻(xiàn)：

[1]九年義務(wù)教育全日制小學(xué)寫字教學(xué)指導(dǎo)綱要.

篇8

2. 朝暮與年歲共往，然后與你一同行至天光。

3. 晚是全世界的晚，安是只給你的安。

4.我快寫不出情話了，只想見你一面。

5. 我喜歡安于現(xiàn)狀，也喜歡來日可期。有你的時(shí)候，安于現(xiàn)狀；沒你的時(shí)候，來日可期。

6.夜幕深沉里 ，你就是我的星。

7.你的名字 ，是我見過最短的情詩。

8.十幾歲的時(shí)候，我遇見了一個(gè)清風(fēng)明月般的人，我什么都沒想，我只想愛他。

9.你一定也是某個(gè)人翹首以盼的驚喜。

10.愿同一粒流星，即便燃其所有，也想跌跌撞撞地闖入你的眼眸。

11.聽喜歡的人說晚安 ，就像是天上的星星掉下來跌進(jìn)夢(mèng)里 ，只為我一個(gè)人閃閃發(fā)亮。

12.萬物皆有不同，比如 ，我有你，而他們沒有。

13.所有的晦暗都留給過往，從遇見你開始，凜冬散盡星河長明。

14.星河璀璨，陽光干凈，在人間所有美好的存在里，不論是活著或者死去，我總是最愛你。

15. 我半生穿過楓葉,抖落白雪 ，就為奔向你面前 ，由你在我手心,塞一片春天。

16.龍應(yīng)當(dāng)藏在云里 ，你應(yīng)當(dāng)藏在心里。

17.這世上美好的東西不太多，立秋傍晚從河對(duì)岸吹來的風(fēng)，二十來歲笑起來要人命的你。

18.愛情是一件得體的事 ，可是愛你我從來沒有分寸。

19.見不到想，見到便笑。見不到思之如狂，見到便心花怒放。

20.能讓我狂奔的，除了大雨就只有你了。

21.你身上有我余生的味道。

22.即使我張牙舞爪，也希望在你眼里我是最好的寶貝.

23.想牽你的手，從心動(dòng)，到古稀，到盡頭。

24.在一起，雞毛蒜皮也是故事。

25.溫山軟水繁星千萬不及你眉眼半分。

26.我以為我看夠了陽光 ，它泛濫得多廉價(jià)而尋常 ，直到與你人海相望 ，才知我從未曾真的見過陽光.

27.像星星燃燒天空，像花墜落在春天，像大雪覆蓋冬天。你也這樣，點(diǎn)亮了我所有的世界。

28.半途而廢不好 所以我建議你喜歡我到老。

29.我喜歡你就像是煙火升空，會(huì)在心里每一個(gè)小地方，都綻放小小的煙花，在心里噼里啪啦的炸開。

篇9

美國男子申請(qǐng)與電腦結(jié)婚遭拒控訴政府歧視

日前，美國猶他州一名男子向美國第十巡回上訴法院遞交了一紙長達(dá)50頁的訴狀，在訴狀中他控訴猶他州政府部門對(duì)于他要和其蘋果筆記本電腦結(jié)婚的請(qǐng)求不予批準(zhǔn)，認(rèn)為這屬于歧視行為。這名美國猶他州男子名叫克里斯?塞維爾，他在訴狀中稱，自己和“電腦配偶”的感情和那些同性戀情侶無異。據(jù)稱，克里斯的上訴實(shí)際上是在質(zhì)疑猶他州禁止同性戀結(jié)婚的法案。在訴狀中，克里斯表示，猶他州相關(guān)政府部門不批準(zhǔn)其與“電腦配偶”的婚姻，是對(duì)他的歧視，而他“對(duì)‘電腦配偶’的情感已超出了狹隘的伴侶范圍”。他指出：“實(shí)際上，我和它結(jié)婚的風(fēng)險(xiǎn)更小，即使婚姻不成功，我們也可以避免在離婚時(shí)發(fā)生激烈爭(zhēng)吵?！睋?jù)了解，2013年，克里斯曾在佛羅里達(dá)州提起類似控訴，卻被法庭裁定屬于“脫離現(xiàn)實(shí)”的行為。

點(diǎn)評(píng)：政府，這就是你的不對(duì)了，我和我的電腦可是真愛！

舊金山富豪網(wǎng)上公布藏寶圖 鈔票藏于公園及廁所

最近幾天，有神秘人士游蕩在美國舊金山及周邊地區(qū)，把美元現(xiàn)鈔放到公園長凳下、瑜伽館鑰匙箱下甚至廁所地板上，然后拍下照片，留下一些文字線索，讓網(wǎng)友們?nèi)ァ皩殹?。神秘人的“推特”賬號(hào)名叫“隱藏的鈔票”。這些鈔票的最大面值為100美元，有一些是50或20美元。“隱藏的鈔票”對(duì)找到錢的人只有一個(gè)要求――上傳一張拿著錢的圖片。僅僅幾天時(shí)間，“隱藏的鈔票”粉絲數(shù)量就達(dá)到近萬人。據(jù)悉，神秘人投資房地產(chǎn)賺了數(shù)百萬美元，他決定分發(fā)出一部分錢，除了做慈善外，還希望用這種有趣又富有創(chuàng)造性的方法來完成。神秘人表示，今后每周會(huì)藏一兩次錢，這是他回饋社會(huì)同時(shí)獲得快樂的方式。

點(diǎn)評(píng)：中國的富人們，你們?cè)谀睦?？讓我看到你們，我們也來玩藏寶游戲吧?/p>

萌寵

惡犬撕咬小主人 家貓飛身將其擊退

日前，加州貝克斯菲爾德一戶人家在網(wǎng)上傳了一段家中小貓咪從狗嘴里勇救小主人的視頻。當(dāng)?shù)貢r(shí)間5月13日，這戶人家的小男孩在騎自行車時(shí)受到狗狗襲擊。家里的小貓咪見狀立刻沖出去，嚇跑了比它大得多的狗狗。在這段監(jiān)控?cái)z像頭拍到的56秒視頻里，還可以看到小男孩腿上幾處很深的傷口。不過家人說他并無大礙?！拔壹邑堖湓趷喝粑覂鹤訒r(shí)出來保護(hù)他，并在它對(duì)孩子造成更大傷害前把它趕跑了。謝天謝地，我兒子沒事?！毙∧泻⒌母赣H羅杰?特里安塔菲洛在視頻里說道。

點(diǎn)評(píng)：俺可是小貓中的戰(zhàn)斗機(jī)，話說，下次能多給點(diǎn)魚吃嗎？

寵物犬坐副駕飛滿250小時(shí)獲機(jī)務(wù)人員證件

英國一只3歲的棕色拉布拉多犬卡利在飛行員主人格雷厄姆的帶領(lǐng)下，飛行滿250小時(shí)后成功獲得了國際飛行員組織認(rèn)可的機(jī)務(wù)人員證件。此后，卡利在飛機(jī)上會(huì)受到貴賓待遇，有一條通道專門為它而開設(shè)。格雷厄姆成為私人飛行員已有13年，他擁有一臺(tái)塞斯納210型6人座私人飛機(jī)。他在自己的寵物犬卡利僅僅3個(gè)月大的時(shí)候就帶著它飛行。格雷厄姆說：“卡利非常喜歡坐副駕駛的位置，來享受飛行的樂趣?？ɡ淮┥献约旱臒晒鈯A克就知道自己馬上就要飛行了，便表現(xiàn)得非常興奮?！彼纸又f道，“這個(gè)證件使我們走到哪里都能夠得到一些優(yōu)惠，在乘坐其他飛機(jī)的時(shí)候人們看到此證件都會(huì)捧腹大笑?！?/p>

點(diǎn)評(píng)：對(duì)于這個(gè)幸福的小狗，小編想說：讓開，讓我來坐這里！

科技

美國發(fā)明“讀夢(mèng)機(jī)” 可從人腦提取夢(mèng)中人物形象

隨著科技的發(fā)展，科學(xué)家對(duì)于大腦的認(rèn)識(shí)越來越深入，甚至可以識(shí)別大腦信號(hào)，從而還原大腦里浮現(xiàn)的映像。從時(shí)間上講，睡眠占去人生約三分之一的時(shí)間。也就是說，對(duì)于一個(gè)天天愛做夢(mèng)的人來說，人生的三分之一都是在夢(mèng)境中扮演著各種角色，遇見各種見過或沒見過的人臉，經(jīng)歷著各種稀奇古怪的場(chǎng)景。夢(mèng)境反映了我們的潛意識(shí)，卻容易忘記。現(xiàn)在好了，美國科學(xué)家研制出了“讀夢(mèng)機(jī)”。未來的某一天，你或許就能記住夢(mèng)中的人，讀懂自己的潛意識(shí)了。

點(diǎn)評(píng)：萬一夫妻雙方從“讀夢(mèng)機(jī)”上看到對(duì)方夢(mèng)里的男神女神不是自己呢？這得毀了多少家庭啊。

基因相似的人易成夫妻 如何相吸暫未確定

都說夫妻緣分天注定，但美國學(xué)者的最新研究表明，這也可能與脫氧核糖核酸（DNA）有關(guān)。相較于兩個(gè)陌生人之間，丈夫和妻子之間往往擁有更為相似的DNA。也就是說，多數(shù)人傾向選擇與自己DNA相似者結(jié)婚。這項(xiàng)研究由美國科羅拉多大學(xué)的多明戈?duì)款^進(jìn)行。他的研究小組分析了825對(duì)白人夫婦的基因組，特別是DNA基本組成單元，即決定個(gè)體獨(dú)特性的單核酸間的堿基差別，再與隨機(jī)選擇的非配偶個(gè)體對(duì)比。結(jié)果顯示，婚姻配偶在DNA上更相似，這種現(xiàn)象被稱為遺傳型婚姻配對(duì)。至于人們?nèi)绾握页雠c自己基因相似的人，多明戈表示目前還無法確定。有報(bào)道稱，這一研究結(jié)果可能會(huì)改變醫(yī)學(xué)界對(duì)一些遺傳疾病的評(píng)估方法，目前統(tǒng)計(jì)模型的計(jì)算方法都是基于配偶基因隨機(jī)配對(duì)的假設(shè)，新發(fā)現(xiàn)對(duì)改善這些模型有重要意義。

點(diǎn)評(píng)：終于明白了，兩口子之所以成為兩口子，是因?yàn)榛蛳嗨啤?/p>

奇趣

美國推“租用紳士”網(wǎng)站 200美元/小時(shí)起價(jià)

日前，美國一家公司推出了“租用紳士”網(wǎng)站，每小時(shí)起價(jià)200美元，顧客能夠從許多帥氣又聰明的男性中挑選并預(yù)訂“臨時(shí)伴侶”。報(bào)道稱，這些“紳士”可以擔(dān)任約會(huì)對(duì)象、為對(duì)方做飯，甚至修下水管道。但他們?cè)诠ぷ髌陂g不做的事情就是“真正上鉤”，不能接吻，更不能與顧客發(fā)生關(guān)系。網(wǎng)站的一位客戶瑪麗婭表示，想要找一個(gè)“品質(zhì)好”的男人度過時(shí)光很難，想要了解一個(gè)人需要經(jīng)過整個(gè)約會(huì)程序，而在這個(gè)網(wǎng)站，只需要點(diǎn)擊幾下鼠標(biāo)就能夠做到。然而，人際關(guān)系專家巴恩斯表示，雇用臨時(shí)伴侶可能破壞婦女找到真愛的機(jī)會(huì)。

點(diǎn)評(píng)：什么時(shí)候中國推出這項(xiàng)服務(wù)呢？這樣那些大齡剩女就不用再發(fā)愁被逼婚了，想要什么型號(hào)就租什么，這個(gè)“feel”倍兒爽！

西伯利亞“睡美人”小鎮(zhèn) 居民連續(xù)6天昏睡不起

篇10

[關(guān)鍵詞] 人參皂苷Rb1； 阿霉素； 自噬； H9c2細(xì)胞

Protective effect of ginsenoside Rb1 on doxorubicin

induced myocardial autophagy

LI Longfei， MA Zengchun*， WANG Yuguang， TANG Xianglin， TAN Hongling， XIAO Chengrong， GAO Yue*

（Institute of Radiation Medicine Science， Academy of Military Medical Sciences， Beijing 100850， China）

[Abstract] Ginsenoside Rb1（Rb1）， which is one of the main ingredients derived from Panax ginseng， has been found to have extensive pharmacological activities including antioxidant， antiinflammatory， anticancer properties. In this study， the effect of Rb1 on doxorubicininduced myocardial autophagy was studied with H9c2 as the study object. CCK8 method， transmission electron microscope observation， fluorescence staining observation and Western blot were used to detect changes in H9c2 cell proliferation and autophagy after treatment. According to the results， doxorubicin could cause cell viability decrease， significant increase in the LC3Ⅱ/LC3I ratio and downregulation of the expression of p62. Pretreatment with ginsenoside Rb1 inhibited cell viability decrease and increase in doxorubicininduced autophagic structure and LC3Ⅱ/LC3I ratio， and downregulation of the expression of p62. In conclusion， doxorubicin could induce H9c2 cell death and induce autophagy， and ginsenoside Rb1 showed a protective effect on DOXinduced cardiotoxicity， which may be correlated with suppression of DOXinduced autophagy.

[Key words] ginsenoside Rb1； doxorubicin； autophagy； H9c2 cell

自噬是細(xì)胞受到刺激后產(chǎn)生雙層膜囊泡包裹胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)送到溶酶體降解的過程，是真核生物所特有的進(jìn)化保守過程，其主要功能是清除和降解細(xì)胞內(nèi)受損的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和衰老的細(xì)胞器以及外來物，保持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)[1]。近年研究發(fā)現(xiàn)，自噬不但參與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)的調(diào)控，而且在心肌肥大、心肌纖維化、心肌缺血再灌注損傷、心力衰竭等多種病理過程中發(fā)揮重要作用[25]。人參為五加科植物人參Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根和根莖，是我國傳統(tǒng)名貴中藥材，在我國藥用歷史悠久，對(duì)多種疾病具有防治效果。人參皂苷Rb1是人參的主要有效成分之一[6]?，F(xiàn)代藥理研究證明，人參皂苷Rb1可明顯改善缺血性心臟病、各型心律失常、急性或慢性心力衰竭等心臟疾病[7]。阿霉素屬于周期非特異性抗腫瘤藥。文獻(xiàn)報(bào)道，其具有心臟毒性并且會(huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞自噬性死亡[810]。因此，本研究擬用阿霉素建立心肌細(xì)胞自噬損傷模型，探討人參皂苷Rb1對(duì)阿霉素誘導(dǎo)心肌自噬的影響。

1 材料

1.1 藥品與試劑 人參皂苷Rb1購于上海一飛生物科技有限公司（批號(hào)E049517，純度98%）；阿霉素（doxorubicine，DOX）、3MA購自美國Selleck Chemicals公司；DMEM高糖培養(yǎng)基、青霉素鏈霉素雙抗溶液購于GE醫(yī)療公司；胎牛血清（FBS）購自天津康源生物技術(shù)有限公司；磷酸鹽緩沖液（PBS）、PremoTM Autophagy Tandem Sensor RFPGFPLC3B Kit購于美國賽默飛世爾科技公司；CCK8試劑盒購于日本同仁化學(xué)研究所；AntiSQSTM1/p62抗體購自英國Abcam公司；LC3B抗體購自美國CST公司；實(shí)驗(yàn)用水為超純水；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器 VICTOR X型多標(biāo)記酶標(biāo)儀（美國Perkin Elmer公司）；SM 510 META激光掃描共聚焦顯微鏡（德國Zeiss公司）；日立透射掃描電子顯微鏡H7650（日本日立集團(tuán)）；Microfuge 22R型離心機(jī)（美國Beckman公司）；CO2培養(yǎng)箱（美國Thermo公司）；Millipore SimplicityTM185超純水機(jī)（德國Merck集團(tuán)）；VIBS223S電子天平（德國Sartorious公司）。

1.3 細(xì)胞系 本研究采用大鼠胚胎心肌細(xì)胞系H9c2（21）作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，此細(xì)胞系購自北京協(xié)和細(xì)胞資源中心（Cell Resource Center，IBMS，CAMS/PUMC）。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng) H9c2細(xì)胞培養(yǎng)于含10%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)液中（含青霉素鈉100 units?mL-1，鏈霉素100 mg?L-1），放入37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2 d更換1次培養(yǎng)液，待細(xì)胞生長至約80%時(shí)用0.25%胰蛋白酶消化傳代。取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2 細(xì)胞活力檢測(cè) 取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞接種于96孔板中，每孔1×104個(gè)細(xì)胞，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)設(shè)置調(diào)零孔（只加培養(yǎng)基不加細(xì)胞）、細(xì)胞對(duì)照孔和實(shí)驗(yàn)孔，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。待細(xì)胞培養(yǎng)24 h后棄去上清培養(yǎng)液，加入用含2%FBS的DMEM培養(yǎng)基配成的各濃度受試藥物，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后，每孔加入CCK8試劑10 μL，培養(yǎng)箱內(nèi)孵育約1～2 h，使用酶標(biāo)儀在450 nm處測(cè)定吸光度。細(xì)胞存活率=（A給藥組CA調(diào)零孔）/（A對(duì)照組CA調(diào)零孔）×100%。

2.3 電鏡觀察自噬體 細(xì)胞給藥處理后采用刮刀法收集細(xì)胞，經(jīng)過前固定、漂洗、后固定、漂洗、脫水、浸透、包埋、切片等步驟制成超薄切片進(jìn)行透射電鏡觀察。

2.4 RFPGFPLC3B融合蛋白示蹤自噬形成 按照PremoTM Autophagy Tandem Sensor RFPGFPLC3B Kit說明書，每1萬細(xì)胞中加入2 μL轉(zhuǎn)染試劑，孵育16 h，將RFPGFPLC3B融合蛋白轉(zhuǎn)染至H9c2細(xì)胞。轉(zhuǎn)染成功后進(jìn)行給藥處理，采用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察。

2.5 Western blot 法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白 取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞接種于25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，每瓶約5×104個(gè)細(xì)胞。進(jìn)行給藥處理后，收集各培養(yǎng)瓶細(xì)胞，離心，PBS漂洗，加入細(xì)胞裂解液，提取細(xì)胞總蛋白。經(jīng)BCA法測(cè)定蛋白濃度及變性后，進(jìn)行SDSPAGE電泳，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉或BSA封閉，分別加入LC3B，p62和GAPDH抗體，4 ℃孵育過夜。次日，TBST洗膜3次，加入HRP標(biāo)記的二抗室溫孵育90 min，TBST洗膜3次后用化學(xué)發(fā)光法顯影，采用Image J軟件進(jìn)行條帶分析。

2.6 稻莘治 數(shù)據(jù)用±s表示，計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析；統(tǒng)計(jì)分析軟件使用GraphPad Prism 5.0，以P

3 結(jié)果

3.1 人參皂苷Rb1減輕阿霉素引起的細(xì)胞損傷 阿霉素0，0.5，1，2.5，5，10，20 μmol?L-1處理24 h后，采用CCK8法檢測(cè)H9c2細(xì)胞活力的變化。結(jié)果顯示，阿霉素在1～20 μmol?L-1對(duì)H9c2細(xì)胞活力具有顯著的抑制作用，且呈明顯的量效關(guān)系（圖1）。不同濃度的人參皂苷Rb1預(yù)處理6 h后加入5 μmol?L-1DOX共孵育24 h，采用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活力。結(jié)果顯示，人參皂苷Rb1可以逆轉(zhuǎn)阿霉素導(dǎo)致的H9c2細(xì)胞活力下降，表明人參皂苷Rb1可以抑制阿霉素誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞死亡（圖2）。

3.2 阿霉素誘導(dǎo)H9c2細(xì)胞自噬活化模型的建立 為了選擇合適的濃度以及時(shí)間進(jìn)行阿霉素自噬模型的建立，分別采用0，0.5，1，2.5，5，10，20 μmol?L-1 DOX處理細(xì)胞12 h和1 μmol?L-1DOX處理細(xì)胞0，3，6，12，24，48 h后提取細(xì)胞蛋白，采用Western blot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白的變化。結(jié)果顯示，阿霉素可劑量依賴性（0～10 μmol?L-1）以及時(shí)間依賴性（0～48 h）地導(dǎo)致LC3BⅡ/ LC3BⅠ升高并使p62蛋白含量降低，表明阿霉素可導(dǎo)致H9c2細(xì)胞自噬活化。根據(jù)數(shù)據(jù)分析結(jié)果，選擇1 μmol?L-1DOX處理細(xì)胞12 h進(jìn)行造模（圖3）。

3.3 人參皂苷Rb1抑制阿霉素誘導(dǎo)的H9c2自噬活化 50 μmol?L-1人參皂苷Rb1預(yù)處理6 h加入1 μmol?L-1DOX共孵育12 h后，收集細(xì)胞，制備超薄切片，采用透射電鏡觀察自噬體。與對(duì)照組相比，DOX組可以明顯觀察到自噬結(jié)構(gòu)，人參皂苷Rb1預(yù)處理組自噬結(jié)構(gòu)則不明顯（圖4）。

將RFPGFPLC3B融合蛋白轉(zhuǎn)染至H9c2細(xì)胞后，50 μmol?L-1人參皂苷Rb1和5 mmol?L-13MA分別預(yù)處理6 h加入1 μmol?L-1DOX共孵育12 h后，進(jìn)行熒光觀察。與對(duì)照組相比，DOX組merge后紅色熒光明顯增強(qiáng)，提示RFPGFPLC3B融合蛋白多定位于溶酶體或自噬溶酶體內(nèi)，即自噬流活化（圖5）。人參皂苷Rb1預(yù)處理與自噬抑制劑3MA預(yù)處理組merge后紅色熒光減弱，提示其抑制DOX誘導(dǎo)的自噬活化（圖5）。

50 μmol?L-1人參皂苷Rb1和5 mmol?L-13MA分別預(yù)處理6 h加入1 μmol?L-1DOX共孵育12 h后，采用Western blot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白的變化。結(jié)果顯示，人參皂苷Rb1預(yù)處理與自噬抑制劑3MA預(yù)處理組LC3BⅡ/LC3BⅠ明顯低于DOX組，同時(shí)p62蛋白表達(dá)亦有部分升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示人參皂苷Rb1可以抑制DOX誘導(dǎo)的自噬活化（圖6）。

4 討論

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