導(dǎo)語：如何才能寫好一篇醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)常用染色方法，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

[關(guān)鍵詞] 抗酸桿菌；缸染法抗酸染色顯微鏡；檢查結(jié)果

[中圖分類號] R331 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）03（b）-0083-03

[Abstract] Objective To analyze the application effect of cylinder dyeing acid-fast stain microscopy method in examining the acid-fast bacilli results. Methods 100 cases of patients with tuberculosis admitted and treated in our unit from January 2008 to January 2016 were conveniently selected as the observation group， and 100 cases of patients with tuberculosis admitted and treated in our unit at the same period were selected as the control group， the control group were given the monolithic separated dyeing， while the observation group were given the monolithic immersion mixture dyeing， and the examine results were compared between the two groups. Results The difference in the test rate of acid-fast bacillus between the observation group and the control group had statistical significance by comparison （95.00%vs 80.00%）（P

[Key words] Acid-fast bacilli； Cylinder dyeing acid-fast stain microscopy； Examination results

Y核病是我國發(fā)病率極高的一種慢性傳染病，該病主要由結(jié)核桿菌感染而誘發(fā)，因此給予結(jié)核病患者應(yīng)用一種可靠、操作簡單的篩選方法進(jìn)行檢查意義重大[1-2]。在臨床上預(yù)防和診斷結(jié)核疾病的途徑主要是通過檢測結(jié)核桿菌及分析其病理而實(shí)施的，所以，如何科學(xué)有效地檢查出分支桿菌的細(xì)菌，準(zhǔn)確迅速發(fā)現(xiàn)傳染源對于結(jié)核病患者的臨床診治具有十分重要的意義。缸染法抗酸染色顯微鏡方法是當(dāng)前臨床檢查結(jié)核病常用的方法之一，該檢查方法查找患者痰液中的抗酸桿菌時(shí)，操作較簡單，并不需要使用昂貴的儀器設(shè)備，同時(shí)具有極強(qiáng)的特異性，臨床工作人員可以省去進(jìn)一步確認(rèn)的步驟，從而明顯提高結(jié)核病控制工作的質(zhì)量[3-5]。為了分析抗酸桿菌應(yīng)用缸染法抗酸染色顯微鏡方法進(jìn)行檢查的結(jié)果，該文對2008年1月―2016年1月該單位收治的200例結(jié)核病患者作出研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選擇該單位收治的100例結(jié)核病患者作為觀察組，其中男64例，女36例；年齡21～37歲，平均年齡（22.26±1.08）歲；病程0.1～3年，平均病程（1.02±0.27）年。同時(shí)將該單位同期收治的100例結(jié)核病患者設(shè)為對照組，其中男62例，女38例；年齡20～36歲，平均年齡（22.14±1.02）歲；病程0.2～3年，平均病程（1.06±0.25）年。兩組患者的一般資料經(jīng)對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可進(jìn)行對比。

1.2 方法

兩組患者在2周內(nèi)已進(jìn)行抗酸桿菌檢查，若患者檢查結(jié)果顯示為陽性，則均取1份痰液標(biāo)本，每份痰液標(biāo)本均作直接涂片6張，自然干燥后，固定放置在100 mL初染劑中進(jìn)行染色，時(shí)間為5 min，然后取出4片使用自來水沖洗，用脫色劑脫色后，再用自來水沖洗，其中2片放置在100 mL脫色劑中，剩下2片則放置在100 mL復(fù)染劑中。上述涂片均各使用1張新玻片將其涂層盡量刮擦下來混入各染色組分中，并且當(dāng)做當(dāng)天的污染攻擊染液組分。其中對照組患者的標(biāo)本直接涂片采取單片分置染色，觀察組患者的標(biāo)本直接涂片采取單片浸入混合染色，模擬進(jìn)行平行檢測。同時(shí)取兩組抗酸桿菌檢查結(jié)果為陰性者的痰標(biāo)本直接涂片3份，主要當(dāng)做污染法陰性無污染對照。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

選擇SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件以及excel軟件分析兩組患者的全部數(shù)據(jù)資料，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P

2 結(jié)果

2.1 兩組患者鏡檢結(jié)果對比

觀察組患者的抗酸桿菌檢出率為95.00%，對照組患者的抗酸桿菌檢出率為80%，將兩組患者的抗酸桿菌檢出率進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)觀察組明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.2 兩組患者污染率對比

觀察組患者的抗酸桿菌檢查污染率為0.00%，對照組患者的抗酸桿菌檢查污染率為10.00%，將兩組患者的抗酸桿菌檢查污染率進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)觀察組明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

目前臨床檢查抗酸桿菌時(shí)，臨床標(biāo)本直接涂片抗酸染色顯微鏡方法是應(yīng)用范圍較廣的一種檢查方法，該檢查方法相對于熱染法來說，操作步驟更簡單，并且染液用量更少，同時(shí)還能對環(huán)境進(jìn)行保護(hù)[6-9]。當(dāng)前國內(nèi)結(jié)核病控制對策中，通過痰涂片對抗酸桿菌進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)方法是結(jié)核病控制工作人員找出傳染源的主要方法，該檢查方法設(shè)備并不復(fù)雜，操作難度低，同時(shí)可以快速獲取報(bào)告結(jié)果，具有極高的特異性[10-12]。但是直接涂片抗酸染色顯微鏡方法也存在部分缺點(diǎn)，比如敏感性不高，檢驗(yàn)結(jié)果較容易受痰標(biāo)本質(zhì)量、留置時(shí)間以及臨床檢驗(yàn)人員等因素的影響?；诖?，詳細(xì)分析缸染法抗酸染色顯微鏡方法的優(yōu)缺點(diǎn)，并制定對應(yīng)措施，可直接關(guān)系到抗酸桿菌的臨床檢查結(jié)果[13-14]。

該研究結(jié)果顯示，觀察組抗酸桿菌檢出率95.00%，對照組抗酸桿菌檢出率80.00%，對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

綜上所述，抗酸桿菌檢驗(yàn)過程中使用缸染法抗酸染色顯微鏡方法，污染發(fā)生率較低，保證檢查結(jié)果，值得推廣。

[參考文獻(xiàn)]

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篇2

【關(guān)鍵詞】 兒童； 細(xì)菌耐藥監(jiān)測； 耐藥率

兒科臨床使用廣泛，而兒童可選擇的抗菌藥物品種有限，因此實(shí)時(shí)監(jiān)測病原菌種類的變遷及藥物敏感性變化，對兒科臨床合理選擇抗菌藥物有重要的指導(dǎo)意義?，F(xiàn)將某兒童醫(yī)院2012-2013年細(xì)菌微生物實(shí)驗(yàn)室檢出病原菌和耐藥性進(jìn)行回顧分析，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 2012-2013年各臨床科室送檢的各類陽性標(biāo)本（痰液、血液、糞便、胸水、膿液、咽拭子、各類灌洗液等）中分離并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的病原菌株。標(biāo)本送檢和保存參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）。分析結(jié)果時(shí)剔除同一患者重復(fù)菌株，非無菌部位標(biāo)本（如痰液）至收集感染標(biāo)本菌株。

1.2 細(xì)菌培養(yǎng)、分離、鑒別及藥敏試驗(yàn) （1）標(biāo)本接種和培養(yǎng)參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）進(jìn)行，細(xì)菌的鑒定采用PHOENIX 100型全自動(dòng)微生物分析儀儀器，藥敏試驗(yàn)采用PHOENIX 100型全自動(dòng)微生物分析儀儀器配套的藥敏板，操作嚴(yán)格按照PHOENIX100說明書，同時(shí)結(jié)合手動(dòng)監(jiān)測結(jié)果。（2）質(zhì)控菌株：大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞菌ATCC27853均購置衛(wèi)生部。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對計(jì)數(shù)資料進(jìn)行 字2檢驗(yàn)，以P

2 結(jié)果

2.1 2012-2013年主要病原菌的檢出情況 近2年檢出主要病原菌的種類變化不大，2013年較2012年細(xì)菌總數(shù)有所增加，但各主要病原菌的比例下降，說明其他病原菌檢出增加。具體見表1。

2.2 主要抗菌藥物耐藥率的比較 主要革蘭染色陽性菌及陰性菌對各類抗菌藥物的耐藥率見表2～3。

2.3 銅綠假單胞菌對常用抗菌藥物耐藥性的比較 近2年銅綠假單胞菌對大部分抗菌藥物耐藥率升高明顯（P

3 討論

近2年檢出的兒童疾病病原菌主要為革蘭染色陰性菌，與文獻(xiàn)[1]報(bào)道一致。革蘭染色陰性細(xì)菌中以大腸埃希菌為主。表皮葡萄球菌在本院革蘭染色陽性菌中檢出率最高與陳婷等[2]檢測結(jié)果一致，提示過去認(rèn)為是無致病性或弱致病性的菌株已經(jīng)成為醫(yī)院感染中臨床多見的病原菌。

本院革蘭染色陽性菌耐藥率從高到低依次為溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌，這3種細(xì)菌對青霉素耐藥率均85%～95%，對紅霉素耐藥率均70%～90%；金黃色葡萄球菌對阿莫西林棒酸耐藥率由25.3%升高至57.3%，對苯唑西林耐藥率由15.2%下降至9.3%，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3-4]報(bào)道一致。未檢出對萬古霉素耐藥菌株。萬古霉素為糖肽類抗菌藥物，是臨床上治療耐甲氧西林葡萄球菌的最為經(jīng)濟(jì)有效的藥物[5]，因此為防止和減緩耐萬古霉素的葡萄球菌的出現(xiàn)，將萬古霉素作為特殊限制級抗菌藥物使用有重要意義。

主要革蘭染色陰性桿菌對各類抗菌藥物耐藥率均有不同程度升高。大腸埃希菌、克雷伯菌對青霉素類、第一代、第二代頭孢菌素類抗菌藥物耐藥率均達(dá)75%以上，對三代頭孢菌素類頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢噻肟耐藥率也高達(dá)50%以上，對頭孢他啶、第四代頭孢菌素類耐藥率20%～30%，對加酶抑制劑哌拉西林他唑巴坦和頭孢哌酮舒巴坦的耐藥率升高，但

2013年銅綠假單胞菌對大部分抗菌藥物耐藥率較2012年升高明顯（P

參考文獻(xiàn)

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篇3

關(guān)鍵詞： 臨床微生物學(xué) 基本技術(shù) 實(shí)驗(yàn)考核 方法 應(yīng)用

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)的學(xué)生畢業(yè)后大多從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室工作，除了理論知識(shí)外，熟練的實(shí)驗(yàn)操作和技能是他們立足的基礎(chǔ)。臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)的重要專業(yè)課，是一門實(shí)踐性和應(yīng)用性均很強(qiáng)的學(xué)科。隨著感染性疾病類型的改變，新發(fā)和再發(fā)病原體的不斷增加，臨床微生物學(xué)在臨床檢驗(yàn)工作中占據(jù)重要地位，并對培養(yǎng)合格的臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的專業(yè)人才提出了更高要求［1］。另外，臨床微生物學(xué)接觸的多為病原微生物，必須樹立“有菌觀念”，保證“無菌操作”，充分掌握生物安全的相關(guān)知識(shí)，才能適應(yīng)臨床和科研工作。因此，在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，教師必須高度重視對學(xué)生的基本實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練和培養(yǎng)良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣，做到從頭從嚴(yán)抓起，使學(xué)生熟練掌握各項(xiàng)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)，融會(huì)貫通，并加強(qiáng)探索和創(chuàng)新等科學(xué)素養(yǎng)的培養(yǎng)。

為提高教學(xué)質(zhì)量，我們實(shí)行在完成微生物學(xué)基本技術(shù)教學(xué)后，對學(xué)生進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核。多年的經(jīng)驗(yàn)顯示，對微生物學(xué)基本技術(shù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化考核，不僅可評價(jià)學(xué)生對基本技術(shù)的掌握程度，進(jìn)一步規(guī)范基本技術(shù)操作，促進(jìn)學(xué)生學(xué)習(xí)的主動(dòng)性和積極性，而且是評價(jià)和提高教學(xué)質(zhì)量、推進(jìn)教學(xué)改革的有力依據(jù)。

一、臨床微生物學(xué)基本技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核內(nèi)容及考核目標(biāo)

在臨床微生物學(xué)中，實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)重要包括顯微鏡使用、革蘭染色、培養(yǎng)基制備、消毒與滅菌、細(xì)菌分離與培養(yǎng)［2］。根據(jù)教學(xué)大綱和實(shí)際情況，我們選擇革蘭染色和分區(qū)劃線兩個(gè)項(xiàng)目作為實(shí)驗(yàn)考核項(xiàng)目，并要求在20分鐘內(nèi)完成操作并作出染色結(jié)果報(bào)告。其中革蘭染色主要檢查學(xué)生對革蘭染色技術(shù)的掌握情況，染色結(jié)果判斷和報(bào)告準(zhǔn)確性，以及顯微鏡使用和維護(hù)；分區(qū)劃線除了考核學(xué)生對分區(qū)劃線技術(shù)的掌握情況外，還包括無菌操作、接種環(huán)使用、開/拿平皿及劃線的手法、實(shí)驗(yàn)材料標(biāo)記、清理臺(tái)面等實(shí)驗(yàn)習(xí)慣的考核。

二、臨床微生物學(xué)基本技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核方法

目前臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課都是小班教學(xué)，我院基本上是一個(gè)教師負(fù)責(zé)28―32名學(xué)生，每個(gè)年級由3―4位教師帶教。為避免教師個(gè)人習(xí)慣和師承的差異，在臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中實(shí)行規(guī)范化帶教，對教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)方法，以及實(shí)驗(yàn)操作基本技術(shù)等方面均進(jìn)行統(tǒng)一。這樣，可以有效避免因教師因素引起的差異，使標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核能順利進(jìn)行。

臨床微生物學(xué)基本技能標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核，包括實(shí)驗(yàn)考核組織、標(biāo)準(zhǔn)化操作方法、標(biāo)準(zhǔn)化監(jiān)考和記錄、標(biāo)準(zhǔn)化評分標(biāo)準(zhǔn)、修正和預(yù)防措施。具體方法和操作過程如下。

1.實(shí)驗(yàn)考核組織

在實(shí)驗(yàn)課的第一堂課，即告知學(xué)生要進(jìn)行基本技術(shù)考核。在考核前1周，教研室統(tǒng)一對學(xué)生講解考核要求和紀(jì)律，考核內(nèi)容及評分標(biāo)準(zhǔn)等文件。考前2天，實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備好考核用玻片、試管架、接種環(huán)、記號筆、培養(yǎng)基、各種試劑、顯微鏡等材料和儀器。考前1天轉(zhuǎn)移考核用菌種，保證細(xì)菌處于對數(shù)生長期。教研室對參加考核的所有學(xué)生隨機(jī)安排考試地點(diǎn)和時(shí)間，考核名單及具體安排于考前1天張貼在實(shí)驗(yàn)室門口，由非帶教老師擔(dān)任監(jiān)考老師。

2.標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核內(nèi)容

選擇金黃色葡萄球菌ATCC25923和大腸埃希菌ATCC25922作為考試用菌種。每個(gè)學(xué)生一個(gè)菌種，編寫不同號碼。要求在20分鐘內(nèi)完成革蘭染色和分區(qū)劃線兩個(gè)項(xiàng)目操作，并作出染色結(jié)果報(bào)告。

3.標(biāo)準(zhǔn)化操作方法

嚴(yán)格無菌操作。革蘭染色包括做好標(biāo)記，正確制片；自然干燥；火焰固定；結(jié)晶紫初染，盧戈碘液媒染，95%酒精脫色，稀釋石碳酸復(fù)紅復(fù)染；吸水紙吸干；油鏡觀察；結(jié)果報(bào)告；油鏡和玻片清洗；臺(tái)面整理。分區(qū)劃線包括標(biāo)記，劃線的姿勢；平皿打開的手法，平皿放置；平皿開口朝向；劃線分布；放培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.標(biāo)準(zhǔn)化監(jiān)考和記錄

按照考核安排表，學(xué)生在規(guī)定時(shí)間和地點(diǎn)進(jìn)行操作并報(bào)告結(jié)果，每位教師在每個(gè)時(shí)間段負(fù)責(zé)3―4名學(xué)生，對學(xué)生的每一個(gè)操作進(jìn)行監(jiān)督并記錄，當(dāng)學(xué)生在油鏡下找到細(xì)菌后，監(jiān)考教師檢查染色結(jié)果并記錄。學(xué)生在記錄單上填寫染色結(jié)果報(bào)告并簽名。加強(qiáng)考場紀(jì)律，用計(jì)時(shí)器提醒學(xué)生。教師不回答學(xué)生任何與考核有關(guān)的問題。

5.標(biāo)準(zhǔn)化評分標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)考核成績以20分計(jì)，直接計(jì)入課程總成績。分?jǐn)?shù)分配如下。

（1）革蘭染色技術(shù)9分。標(biāo)記0.5分；制片1分；固定1分；染色步驟2分（結(jié)晶紫初染，盧戈碘液媒染，95%酒精脫色，稀釋石碳酸復(fù)紅復(fù)染每個(gè)步驟各0.5分）；染色結(jié)果正確1分；報(bào)告正確1分；顯微鏡使用和維護(hù)2分；玻片清洗及臺(tái)面清理0.5分。

（2）分區(qū)劃線9分。平皿底部標(biāo)記0.5分；平皿放置0.5分；無菌操作2分（接種環(huán)滅菌及冷卻、平皿開口朝向、單手開平皿、酒精燈正確使用各0.5分），劃線姿勢和手法1分；送培養(yǎng)箱培養(yǎng)1分；劃線分布2分；分離結(jié)果2分（劃線分布和分離結(jié)果由老師在培養(yǎng)后第二天評分）。

（3）其他2分。在規(guī)定時(shí)間20分鐘內(nèi)按要求完成所有操作。超時(shí)1分鐘扣0.5分，超時(shí)2分鐘扣1分，超時(shí)3分鐘扣2分，超時(shí)4分鐘扣3分，超時(shí)5分鐘扣5分。超過5分鐘未完成操作，參加補(bǔ)考。補(bǔ)考以總成績?yōu)?8分計(jì)，通過者實(shí)驗(yàn)考核成績?yōu)?2分。

6.修正和預(yù)防措施

對不會(huì)用顯微鏡（包括油鏡下找不到視野，不會(huì)使用油鏡等），結(jié)果報(bào)告錯(cuò)誤（與鏡下結(jié)果不符，如球菌報(bào)告為桿菌，紅色報(bào)告為革蘭陽性等）的學(xué)生，無論前面各項(xiàng)操作結(jié)果如何，一律重考。

考核結(jié)束后，進(jìn)行分析并做總結(jié)。除了對學(xué)生考核成績進(jìn)行分析外，還特別注意在考核過程中出現(xiàn)的各種問題，并針對考核中常見的特殊性問題，在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中加以改進(jìn)和提高。

三、標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核應(yīng)用體會(huì)

臨床微生物學(xué)基本技術(shù)實(shí)驗(yàn)考核是以教學(xué)大綱為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的考試，目的是檢驗(yàn)學(xué)生是否達(dá)到教學(xué)大綱要求和學(xué)業(yè)成績的差異。主要考核學(xué)生對常用臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技能的掌握程度。實(shí)驗(yàn)考核結(jié)果不僅可評價(jià)學(xué)生對臨床微生物學(xué)知識(shí)和技術(shù)的掌握程度，而且是評價(jià)教師教學(xué)質(zhì)量的有力依據(jù)。

對醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生，我們一直非常重視他們的臨床微生物學(xué)基本技能訓(xùn)練，在教學(xué)中做到以小組為單位，由帶教教師講解并進(jìn)行操作示教。在學(xué)生自己操作過程中，教師在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)巡回，仔細(xì)觀察學(xué)生操作，對不規(guī)范和錯(cuò)誤的操作及時(shí)糾正，下課前總結(jié)并提醒學(xué)生在試驗(yàn)中出現(xiàn)的問題。由于學(xué)生普遍對醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)檢驗(yàn)專業(yè)和臨床微生物學(xué)的認(rèn)識(shí)，加上學(xué)生均知道要進(jìn)行操作技術(shù)考核，絕大部分學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過程中能做到較積極主動(dòng)地學(xué)習(xí)。

自2005年開始建立標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核體系，2006年開始實(shí)踐以來，我們發(fā)現(xiàn)建立和應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)考核體系，一方面可更好地促進(jìn)學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性：實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)化考核以來，學(xué)生對基本技術(shù)的重視較以往明顯提高，每次實(shí)驗(yàn)中都認(rèn)真操作，完全不需要教師像以前一樣進(jìn)行檢查，真正做到自覺、認(rèn)真，甚至有部分學(xué)生利用課余時(shí)間聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行強(qiáng)化聯(lián)系。另一方面可使實(shí)驗(yàn)考核規(guī)范化，做到有據(jù)可依的評分，避免人為因素等諸多可變因素對學(xué)生成績的影響，做到有據(jù)可依、客觀、合理、公正地評價(jià)和評分。另外，由非帶教教師進(jìn)行監(jiān)考和評分，避免了因帶教教師個(gè)人喜好等因素影響學(xué)生成績，也可進(jìn)一步促進(jìn)實(shí)驗(yàn)帶教的規(guī)范化。

總之，與以前的實(shí)驗(yàn)考核比較，標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核體系不僅能進(jìn)一步促進(jìn)學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性和獨(dú)立解決問題的能力，標(biāo)準(zhǔn)化的評分標(biāo)準(zhǔn)使學(xué)生在完成考核后對自己的成績已經(jīng)心中有數(shù)，避免少數(shù)學(xué)生對自己成績有意見的現(xiàn)象，而且能促進(jìn)學(xué)生在操作過程中養(yǎng)成良好習(xí)慣。臨床微生物學(xué)基本技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)考核是公正、客觀考核學(xué)生學(xué)習(xí)效果、評價(jià)教學(xué)質(zhì)量的重要手段。

參考文獻(xiàn)：

［1］王躍，程曦，王頻佳.臨床檢驗(yàn)微生物學(xué)課程體系改革的探索［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38（1）：73-74.

篇4

【關(guān)鍵詞】TF染色法；快速診斷；治療；淋菌性眼炎

文章編號：1009-5519（2007）19-2866-02 中圖分類號：R77 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Fast diagnosis and treatment of gonococcal ophthalmia in newborn

YU Qiang

(The Maternal and Child Health Hospital of Hongan,Hubei 438400,China)

【Abstract】Objective:To introduce a fast diagnostic way of gonococcal ophthalmia in newborn,ie,TF staining method.Methods:The eye secretion was collected from 25 newborns who were out-and in-patients with much eye secretion and smeared respectively.These smears were stained with TF staining method,and then looked for gonococcus under microscope.The illegimate sexual act of parents and some related sanitations were investigated respectively at the same time.Results:Five of 25 newborns were diagnosed as gonococcal ophthalmia,which agreed with the illegimate sexual act of their parents(unilateral father or mother or both father and mother).The sick newborns with gonococcal ophthalmia were treated in time,and all were cured and discharge.Conclusion:Combined with the related illness of parents(especially illegimate sexual act),the TF staining method could rapidly examine gonococcus in eye secretion of newborn.So it is suggested that the TF staining method possessed a stronger utilized value in the diagnosis of gonococcal ophthalmia in newborn.

【Key words】TF staining method；Fast diagnosis；Treatment；Gonococcal ophthalmia

淋病是最常見的性病之一，在小兒淋病中以新生兒淋菌性眼炎和淋菌性外陰陰道炎較多見，尤其是孕婦感染淋球菌后，增加了母嬰傳播的機(jī)會(huì)，可因分娩將產(chǎn)道的淋菌直接傳染給所生的新生兒，引起眼炎。表現(xiàn)為眼分泌物增多并呈膿性外觀，眼結(jié)膜充血、水腫，不易睜眼。由于淋球菌培養(yǎng)時(shí)間較長，而用涂片檢查，方法簡便、有效并有一定的特異性[1]；為探討一種新的淋菌涂片快速染色方法，特選用了喻強(qiáng)建立的用途廣泛的TF染色法[2～5]，先后對25例有眼分泌物增多的新生兒做淋菌染色檢查，共檢出5例，并結(jié)合患兒家長的病史（均有婚外）將5例診斷為新生兒淋菌性眼炎，現(xiàn)予介紹。

1 資料和方法

1.1 臨床病例：先后選擇25例眼分泌物增多的新生兒，其中門診就診16例，住院患兒9例（剖宮產(chǎn)2例，自然分娩7例），其日齡均在3～22天之間。

1.2 染色液的配制：選用TFM液[2]的配制方法，配制后置一尖嘴的塑料小瓶中保存（容量在10～15 ml即可），放置時(shí)間長時(shí)應(yīng)注意及時(shí)校正或更換。

1.3 染色步驟：用無菌棉簽浸入生理鹽水后再采取新生兒眼分泌物，涂片后待干，滴加1～3滴TFM液，染數(shù)秒鐘（待染液稍轉(zhuǎn)紅即可），背面式?jīng)_片，待干（背式烘干也可，但溫度不宜高），中性樹膠封片再置顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果

經(jīng)TF染色后的標(biāo)本，細(xì)胞著色鮮明，淋菌染成淡藍(lán)色，有時(shí)稍偏紫，有些細(xì)胞內(nèi)含10余對至幾十余對雙球菌，兩菌接觸面平坦或稍凹，呈腎形或卵圓形（菌體的大小與形態(tài)符合淋菌的特征）；在受檢的25例標(biāo)本中，檢出5例淋菌標(biāo)本（其中門診1例，住院4例），為了對照研究，又將這5例眼分泌物拭子再次涂片，用革蘭染色，結(jié)果均檢出革蘭陰性細(xì)胞內(nèi)雙球菌，同時(shí)結(jié)合該5例患兒的家長病史（均有婚外），將這5例診斷為新生兒淋菌性眼炎，并及時(shí)給予了治療，均治愈出院。

3 討論

淋菌對人體的黏膜有特殊的親和力，即使完整的黏膜也可發(fā)生感染，孕婦患淋病后，新生兒于產(chǎn)道分娩時(shí)易感染淋菌性眼炎，如不及時(shí)診斷和治療則會(huì)導(dǎo)致失明。輕癥或無癥狀的淋病患者是重要的傳染源，有資料表明，臨床上有5%～20%的男性和60%的女性感染后無明顯癥狀，由于新生兒淋菌性眼炎可擴(kuò)散發(fā)展，如膿尿、咽炎、頭皮化膿、敗血癥、圣克萊爾病和播散性淋球菌感染[7]，因此當(dāng)新生兒在生后48小時(shí)出現(xiàn)眼分泌物多，呈膿性外觀，眼結(jié)膜充血、水腫時(shí)應(yīng)引起高度注意，有條件的單位可取兩份標(biāo)本，一份快速染色檢查，一份做細(xì)菌培養(yǎng)。有文獻(xiàn)提示[6]，在取分泌物標(biāo)本到實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)之后開始憑經(jīng)驗(yàn)治療，而不是等待結(jié)果。

在染色檢查中，一般常用革蘭染色或美藍(lán)染色，急性淋病的診斷標(biāo)準(zhǔn)為見到“細(xì)胞內(nèi)革蘭陰性雙球菌”，而膿細(xì)胞中?？珊?至數(shù)對，當(dāng)?shù)湫偷募?xì)胞內(nèi)革蘭陰性雙球菌在分泌物涂片中找到時(shí)，也可初步診斷并進(jìn)行治療。本研究之所以選用TF染色法，是因該法具有用途廣泛，操作簡便，可重復(fù)染色并且涂片中的有形成分著色鮮明等特點(diǎn)[6，7]，尤其是染色時(shí)間易掌握（只要滴在標(biāo)本上的染液稍轉(zhuǎn)紅即可）和同一標(biāo)本可直接重復(fù)染色的優(yōu)點(diǎn)是革蘭染色、美藍(lán)染色和姬姆薩染色所不具備的。在快速診斷新生兒淋菌性眼炎時(shí)有一個(gè)值得重視的問題，這就是患兒家長的病史采集（主要是指婚外），尤其是男方有婚外，而女方不知情的情況下，要追問病史并注意方法，及時(shí)診斷輕癥或無癥狀的淋病患者，并對配偶及同時(shí)治療，是避免重復(fù)感染的有效辦法。由于耐藥菌株的出現(xiàn)，新生兒淋菌性眼炎最好住院治療，以便觀察治療效果（并做眼分泌物涂片染色監(jiān)測），必要時(shí)可請眼科會(huì)診。

有專家認(rèn)為，預(yù)防新生兒淋菌性眼炎最有效的方法是對感染的孕婦給予產(chǎn)前治療，新生兒生后1小時(shí)內(nèi)給予0.5%的紅霉素膏涂眼，最好應(yīng)用一次性藥（膏）水，但眼藥水預(yù)防新生兒淋菌性眼炎的有效率尚未肯定，并且無法清除鼻咽部的菌群[7]。值得注意的是，在開始靜脈應(yīng)用抗生素治療的最初24小時(shí)內(nèi)隔離新生兒，由于分泌物有很強(qiáng)的傳染性，要遵循嚴(yán)格的洗手技術(shù)，還要立即用無菌等張生理鹽水沖洗雙眼（每1～2小時(shí)1次）直至洗凈；當(dāng)使用推薦的抗生素進(jìn)行全身治療時(shí)，不必再應(yīng)用局部抗生素治療[6]。

總之，通過上述臨床應(yīng)用研究結(jié)果表明，在快速診斷新生兒淋菌性眼炎時(shí)，TF染色具有較強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值，而新生兒淋菌性眼炎的快速診斷和及時(shí)治療對減少其并發(fā)癥以及該病的預(yù)后均起重要作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 葉順章，張木有.性傳播疾病實(shí)驗(yàn)診斷手冊[M].廣州:廣東科技出版社，1991.21.

[2] 喻 強(qiáng).TF染色法診斷滴蟲性陰道炎的研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，1990，70（3）：175.

[3] 喻 強(qiáng).TF染色法檢出一株多分裂陰道毛滴蟲[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，1991，8（1）：52.

[4] 喻 強(qiáng).TF染色法在常規(guī)血片快速染色中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，1991，7（2）：97.

[5] 喻 強(qiáng).應(yīng)用TF染色進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察[J].陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，1993，8（3）：166.

[6] 魏克倫，楊于嘉.新生兒手冊[M].第五版.第一版.長沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，2006.270.

篇5

關(guān)鍵詞：骨髓檢驗(yàn)報(bào)告；教學(xué)方法；探討

【中圖分類號】G640

骨髓檢驗(yàn)報(bào)告的書寫是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生《血液學(xué)檢驗(yàn)》課程中非常重要的內(nèi)容之一，在常見貧血、白血病等血液病的診斷、協(xié)助診斷和療效觀察過程中，臨床醫(yī)師需要反復(fù)抽取患者的骨髓送血液科進(jìn)行骨髓檢查，每次檢查后檢驗(yàn)醫(yī)師都要填寫骨髓檢驗(yàn)報(bào)告，供臨床醫(yī)師診斷疾病，觀察療效，直到患者病情完全緩解出院為止。因此，骨髓檢驗(yàn)報(bào)告單的填寫質(zhì)量要求非常高，一份良好的骨髓檢驗(yàn)報(bào)告單是骨髓細(xì)胞特征的全部再現(xiàn)，是檢驗(yàn)醫(yī)師骨髓檢驗(yàn)技術(shù)和對臨床資料綜合分析能力的高度體現(xiàn)，檢驗(yàn)醫(yī)師不僅需要較強(qiáng)的識(shí)別骨髓細(xì)胞形態(tài)的能力，寫一份合格的骨髓檢驗(yàn)報(bào)告更重要。學(xué)生在學(xué)習(xí)過程中，對骨髓檢驗(yàn)報(bào)告的書寫常感到非常困難，為了上好這一課，筆者在多年的教學(xué)過程中，積極探索，結(jié)合學(xué)生實(shí)際與臨床實(shí)際，對骨髓檢驗(yàn)報(bào)告單的書寫探索出了一套較好的教學(xué)方法，能使學(xué)生在較短的教學(xué)時(shí)間里寫好一份骨髓檢驗(yàn)報(bào)告，并讓學(xué)生通過骨髓檢驗(yàn)報(bào)告單的書寫，全面熟悉、掌握貧血及白血病等常見血液病的血象及骨髓象特征，學(xué)會(huì)分析骨髓象，掌握相關(guān)骨髓檢驗(yàn)技術(shù)，并正確為常見血液病下診斷?，F(xiàn)將教學(xué)方法交流如下。

1.總結(jié)出一套骨髓檢驗(yàn)報(bào)告基本書寫模板，要求學(xué)生根據(jù)所檢驗(yàn)的血液病的血象和骨髓象特征，按照模板認(rèn)真填寫

根據(jù)教材及臨床實(shí)際，骨髓檢驗(yàn)報(bào)告單的書寫具有一定規(guī)律，但對初學(xué)者學(xué)生來說，要寫好一份骨髓檢驗(yàn)報(bào)告單確是一件非常困難的事，為了讓學(xué)生在課時(shí)數(shù)少的情況下盡快掌握書寫技巧，筆者為學(xué)生總結(jié)出了一套骨髓檢驗(yàn)報(bào)告單書寫基本模板，供學(xué)生參考，要求學(xué)生按照模板要求認(rèn)真分析骨髓象，填寫不缺項(xiàng)。這樣做可以幫助學(xué)生理清思路，有計(jì)劃、有條理地去分析骨髓象，書寫報(bào)告單，減少了學(xué)生走彎路的時(shí)間。

1.1一般情況下骨髓象書寫基本格式

①取材滿意、涂片染色良好。

②骨髓有核細(xì)胞增生程度，粒紅比值。

③粒系細(xì)胞增生程度，所占比值，以哪1-2階段的細(xì)胞為主，各階段細(xì)胞形態(tài)特征。

④紅系細(xì)胞增生程度，所占比值，以哪1-2階段的細(xì)胞為主，各階段細(xì)胞形態(tài)特征。成熟紅細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)。

⑤淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞比值、形態(tài)特征。

⑥全片見到巨核細(xì)胞多少個(gè)，以哪1-2階段細(xì)胞為主，各階段細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)。血小板分布及形態(tài)特點(diǎn)。

⑦全片未見寄生蟲及其他異常細(xì)胞。

1.2常見貧血的骨髓象書寫格式

在報(bào)告基本格式的基礎(chǔ)上，把“4、與3、”對換位置，并要求學(xué)生要特別重點(diǎn)描述幼紅細(xì)胞形態(tài)改變，以及成熟紅細(xì)胞形態(tài)改變特點(diǎn)，因?yàn)椴煌呢氀?，幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞形態(tài)都會(huì)出現(xiàn)不同的形態(tài)改變，這樣有助于貧血的分類和診斷。

1.3常見白血病的骨髓象書寫格式

在報(bào)告基本格式的基礎(chǔ)上，根據(jù)白血病發(fā)生在哪個(gè)系，就將哪個(gè)系的白血病細(xì)胞改變情況放在第3條描寫，第2條不用填寫粒紅比值，未發(fā)生白血病改變的其他系細(xì)胞受抑制。

例如，急性淋巴細(xì)胞白血病L1書寫格式：

①取材滿意、涂片染色良好。

②骨髓有核細(xì)胞增生極度活躍。

③淋巴系細(xì)胞增生極度活躍，以原始淋巴細(xì)胞為主，占65%，幼稚淋巴細(xì)胞占29%，原始淋巴細(xì)胞和幼稚淋巴細(xì)胞以小細(xì)胞為主，大小較一致，核型規(guī)則，細(xì)胞核染色質(zhì)較粗，核仁1-2個(gè)，不太清楚，胞漿量少，退化細(xì)胞較多。

④紅系及粒系細(xì)胞受抑制，細(xì)胞形態(tài)基本正常。

⑤全片見巨核細(xì)胞2個(gè)，血小板少見，形態(tài)基本正常。

⑥全片未見寄生蟲及其他異常細(xì)胞。

2.認(rèn)真批改學(xué)生寫的骨髓檢驗(yàn)報(bào)告，找出問題，并及時(shí)在課堂上講評，指導(dǎo)學(xué)生及時(shí)糾正錯(cuò)誤

一般情況下，就算是照著模板寫報(bào)告，學(xué)生前幾次所寫的報(bào)告都會(huì)出現(xiàn)不少問題。如，常有一些學(xué)生在報(bào)告中沒有描述成熟紅細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)，血小板分布和形態(tài)，出現(xiàn)粒紅比值計(jì)算結(jié)果錯(cuò)誤，忽略第一條“取材滿意、涂片染色良好”及最后一條“全片未見寄生蟲及其他異常細(xì)胞”等。也會(huì)出現(xiàn)不知怎樣描述異常幼紅細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)和白血病細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)，難下診斷等問題。還會(huì)在報(bào)告文字描述中用一些口水話，寫錯(cuò)字、涂改字等。因此，每次學(xué)生交來的骨髓檢驗(yàn)報(bào)告，筆者都會(huì)認(rèn)真批改，在報(bào)告上注明錯(cuò)誤的地方，并把正確的答案也批在報(bào)告上。然后統(tǒng)計(jì)分析學(xué)生出現(xiàn)哪些問題，某種問題出現(xiàn)人數(shù)有多少等情況。在下一次的課堂上，筆者就會(huì)針對學(xué)生出現(xiàn)的問題一一講評，對學(xué)生每一次的進(jìn)步都給予表揚(yáng)。而且，每一次講評都做到講深講透。

2.1骨髓檢驗(yàn)報(bào)告中學(xué)生問題分析：

2.1.1不填取材滿意、涂片染色良好

這一條有的學(xué)生會(huì)不寫，他們認(rèn)為沒必要，但筆者要求一定要寫。因?yàn)檫@一條包含的意義在于檢驗(yàn)醫(yī)師應(yīng)該首先檢查臨床醫(yī)師送檢的骨髓片是否是成功抽取的骨髓涂片，如果取材滿意，才有對骨髓象進(jìn)行分析的價(jià)值。隨后檢驗(yàn)醫(yī)師對骨髓涂片要進(jìn)行瑞特染色，染色良好的片子，骨髓細(xì)胞形態(tài)才好識(shí)別，才能有效分類骨髓細(xì)胞。因此，這一條的書寫，可提醒學(xué)生要重視以上問題，對初學(xué)者來說是必須的。

2.1.2粒紅比值算錯(cuò)

粒紅比值是指檢驗(yàn)醫(yī)師所分類的骨髓細(xì)胞中全部粒系細(xì)胞數(shù)除以全部紅系細(xì)胞數(shù)所得的值，這個(gè)值可以反映骨髓中粒系細(xì)胞和紅系細(xì)胞所占比例是否在正常范圍，表達(dá)方式以正常骨髓粒紅比值為例，粒：紅=2-4：1，有的同學(xué)會(huì)寫成粒紅比值1：2-4，這樣一來，意義就完全不同了，一般是學(xué)生粗心大意和理解錯(cuò)誤的結(jié)果，必須給予糾正，并說明道理。

2.1.3漏填成熟紅細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)

成熟紅細(xì)胞形態(tài)變化，在常見貧血的診斷中具有較大意義，不同的貧血，成熟紅細(xì)胞形態(tài)會(huì)發(fā)生不同的改變。如巨幼細(xì)胞性貧血，骨髓象中成熟紅細(xì)胞大小不均，以大細(xì)胞為主，紅細(xì)胞中央淡染區(qū)不明顯。因此，要求學(xué)生一定要重視成熟紅細(xì)胞形態(tài)描述。

2.1.4漏填血小板分布及形態(tài)特點(diǎn)

血小板數(shù)量的減少、形態(tài)的異常，會(huì)影響機(jī)體止血和凝血的功能，導(dǎo)致機(jī)體組織、器官、粘膜容易出血，或出血不止。如再生障礙性貧血和常見白血病等患者的骨髓中一般會(huì)出現(xiàn)不同程度的血小板減少，或形態(tài)異常，檢驗(yàn)醫(yī)師對骨髓中血小板分布情況和形態(tài)改變的描述，可為臨床醫(yī)師提供患者出血原因，出血程度分析等參考依據(jù)，因此也很重要，要求學(xué)生不能省略或遺漏。

2.1.5忽略全片未見寄生蟲及其他異常細(xì)胞

有些寄生蟲病如瘧疾、弓形蟲病等，在骨髓中可發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的蟲體或寄生蟲滋養(yǎng)體等，如果是血液病合并寄生蟲感染患者，發(fā)現(xiàn)寄生蟲就可為臨床醫(yī)師提供有價(jià)值的診斷依據(jù)。

有些血液病可在骨髓中發(fā)現(xiàn)特殊異常細(xì)胞及病理細(xì)胞，如骨髓癌轉(zhuǎn)移、戈謝病、尼曼匹克病等，如在骨髓中發(fā)現(xiàn)異常的癌細(xì)胞、特殊形態(tài)的戈謝細(xì)胞及尼曼匹克細(xì)胞，對相應(yīng)的疾病有絕對的診斷意義。因此，寫這一條，更重要的是提醒大家在觀察分析骨髓象時(shí)要同時(shí)注意觀察骨髓中是否存在寄生蟲，是否存在特殊異常細(xì)胞，不管有沒有，都要給臨床醫(yī)師一個(gè)明確的回答。

2.1.6異常幼紅細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)和白血病細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)描述不清

出現(xiàn)這個(gè)問題主要有兩個(gè)方面的原因：一是學(xué)生識(shí)別細(xì)胞能力不足，二是沒有掌握相關(guān)血液病的骨髓象特征，看不出特點(diǎn)，抓不住重點(diǎn)，不知該怎樣描述。針對這個(gè)問題，筆者便結(jié)合相應(yīng)血液病骨髓象進(jìn)行認(rèn)真分析，如典型的缺鐵性貧血骨髓象幼紅細(xì)胞改變特點(diǎn)為，幼紅細(xì)胞胞體小，胞漿量少，胞漿邊緣不整齊、嗜堿性，中晚幼紅細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮、深染。同時(shí)加強(qiáng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變投影演示、版圖描繪、顯微鏡下指導(dǎo)，提高學(xué)生識(shí)別骨髓細(xì)胞能力及對血液病骨髓象特征掌握程度。

2.1.7正確下診斷困難

每一份骨髓檢驗(yàn)報(bào)告都需要下一個(gè)診斷意見，為臨床醫(yī)師提出細(xì)胞學(xué)診斷意見或可供臨床參考的意見。骨髓檢查診斷疾病的性質(zhì)一般分為明確診斷、符合診斷、提示性診斷和排出性診斷等，不同的血液病應(yīng)該以不同的方式下不同的診斷，這需要檢驗(yàn)人員具有較高的檢驗(yàn)技術(shù)、較豐富的臨床知識(shí)、以及將檢驗(yàn)結(jié)果與臨床資料相結(jié)合綜合分析的能力。對于初學(xué)者學(xué)生來說，確實(shí)有一定困難。如巨幼細(xì)胞性貧血、各種白血病，通過骨髓檢查可作出明確性診斷，缺鐵性貧血只能做出符合性診斷等。但通過反復(fù)實(shí)驗(yàn)、修改報(bào)告，反復(fù)講解相應(yīng)血液病的診斷要點(diǎn)后，學(xué)生可以基本掌握常見血液病的診斷方法。

2.1.8在報(bào)告文字描述中用一些口水話，寫錯(cuò)字、涂改字

骨髓檢驗(yàn)報(bào)告要求內(nèi)容簡明扼要，突出重點(diǎn)，使用書面、專業(yè)語言，而且不能有任何涂改痕跡，因此對學(xué)生報(bào)告中出現(xiàn)口水話、寫錯(cuò)字、涂改字等現(xiàn)象，筆者要求一定要改正，要求學(xué)生反復(fù)書寫、反復(fù)修改報(bào)告，直到滿意為止。并將實(shí)驗(yàn)報(bào)告作為平時(shí)成績，納入學(xué)期考試總成績。

3.特別講解常用化學(xué)染色在常見血液病的診斷中的重要作用

常用化學(xué)染色有過氧化物酶染色（POX）、特異性酯酶染色（SE）、非特異性酯酶染色（α-NAE）及氟化鈉抑制實(shí)驗(yàn)，鐵染色等。如POX、SE和α-NAE及氟化鈉抑制實(shí)驗(yàn)對常見急性白血?。毙粤＜?xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病）的鑒別具有重要意義；鐵染色，對缺鐵性貧血診斷具有重要意義等。因此，要求學(xué)生在骨髓檢驗(yàn)報(bào)告單中，做了化學(xué)染色的，必須填寫化學(xué)染色結(jié)果。

4.強(qiáng)調(diào)血片檢查在骨髓檢驗(yàn)中的作用

許多血液病不僅骨髓象發(fā)生改變，而且血象也有相應(yīng)改變。如常見急性白血病，不僅骨髓象可見到大量原始、幼稚白血病細(xì)胞，血片中也可查到大量一般絕對見不到的異常原始、幼稚細(xì)胞。因此，血涂片的檢查和描寫對血液病的診斷也很重要，學(xué)生也需要重視。

骨髓檢驗(yàn)報(bào)告主要包括以下幾部分的內(nèi)容：骨髓象、血象、細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果、診斷意見及建議。筆者通過以上幾個(gè)方面的反復(fù)教學(xué)，學(xué)生可在畢業(yè)前基本掌握常見血液病的骨髓檢驗(yàn)報(bào)告書寫方法，并正確下診斷，為學(xué)生將來服務(wù)社會(huì)奠定了良好基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

篇6

［關(guān)鍵詞］根尖封閉；Cortisomol糊劑；染料滲入法；微滲漏

根管充填是根管治療中最重要的一步，其目的是封閉根管系統(tǒng)，尤其是根尖1/3，以防止細(xì)菌進(jìn)入造成根管的再感染。而糊劑的使用是根尖封閉質(zhì)量的關(guān)鍵［1］。據(jù)統(tǒng)計(jì)，根管治療失敗有近60%是由于根管封閉不完全造成的［2］。因而研究者一直都在尋找理想的根管充填材料和方法以徹底封閉根管系統(tǒng)。Cortisomol是目前國外常用的一種根管充填材料，現(xiàn)在國內(nèi)也開始使用，關(guān)于其減輕根尖術(shù)后的疼痛及對治療牙髓和根尖周病有較好的療效［3］已有報(bào)導(dǎo)，而其對根尖孔的封閉能力報(bào)導(dǎo)較少。本實(shí)驗(yàn)通過染料滲入法將Cortisomol糊劑與傳統(tǒng)的氧化鋅丁香油糊劑對根尖孔的封閉性能作對比研究。

1材料與方法

1.1材料Cortisomol根管糊劑（法國碧藍(lán)公司生產(chǎn)），粉由1.1%醋酸強(qiáng)的松龍鹽、多聚甲醛、氧化鋅、紅色氧化劑及賦形劑等組成，液為丁香油，應(yīng)用方法為粉液調(diào)拌；氧化鋅丁香油糊劑（上海齒科材料廠生產(chǎn)），其主要成份為氧化鋅和丁香油，使用時(shí)兩者調(diào)拌而成；牙膠尖（廣東協(xié)禾醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)）。

1.2方法

1.2.1樣本收集和分組收集離體單根管恒牙44顆，要求牙體完整，牙根長度近似。超聲波去除牙面肉芽和結(jié)石，10%福爾馬林液浸。

1.2.2根管預(yù)備和充填將以上所有牙均用金鋼砂片于釉牙骨質(zhì)交界處切除牙冠，拔除根髓后測量并記錄根管工作長度（根管口至根尖孔上方1旁mm處的距離），用K型根管銼按常規(guī)法清理并擴(kuò)大根管至40#，3%過氧化氫液和生理鹽水交替反復(fù)沖洗根管后吸干。采用冷側(cè)壓法按測量好的工作長度進(jìn)行根充，陰性和陽性對照組根管僅充填牙膠尖；A、B組各20顆分別用Cortisomol糊劑和氧化鋅丁香油糊劑加牙膠尖充填根管，拍X片證實(shí)充填良好后，將以上各牙根管口用磷酸鋅粘固粉封閉。

1.2.3染色和微滲漏的測量將以上所有樣本置于37℃、100%濕度孵箱內(nèi)8d，待根充材料凝固后，取出吹干，陽性對照組根面不涂指甲油，陰性對照組為整個(gè)牙根包括根尖孔涂布2層指甲油，A、B組為在距離根尖孔2mm以上根面均勻涂布2層指甲油，靜置24h。將牙根垂直懸吊浸入6mm深1%亞甲藍(lán)液中浸泡6d，取出牙根，流水洗凈吹干，將牙根沿長軸縱形剖開。在帶有目微尺的光學(xué)顯微鏡（×50）下，測量染液自根尖孔向冠方滲入的距離（精確到0.01mm），以雙側(cè)長度的平均值作為最后測得值并記錄。對測量結(jié)果通過SPSS統(tǒng)計(jì)軟件作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用t檢驗(yàn)。以上操作均由1人完成。

2結(jié)果

陽性對照組染色距離均為6mm以上；陰性對照組染液滲入距離為0；Cortisomol糊劑組平均微滲漏距離為1.21mm；而氧化鋅丁香油糊劑組為2.17mm。經(jīng)均數(shù)的顯著性t值檢驗(yàn)，P<0.01，兩組滲漏值有顯著性差異。兩種根充糊劑的微滲漏結(jié)果見表1。

3討論

根充材料的主要作用是提供根尖封閉，以防止細(xì)菌的侵入和細(xì)菌產(chǎn)物從根管系統(tǒng)擴(kuò)散進(jìn)入到根尖周組織［4］。理想的根充材料應(yīng)該具有易操作、阻射、體積穩(wěn)定、不被吸收、對溫度不敏感及能粘附于牙本質(zhì)，無毒，生物相容性好等特點(diǎn)［5］。影響根充材料封閉效能的因素很多，除了與根管壁的清潔度濕度根管預(yù)備狀況有關(guān)外，最重要的因素還是材料的理化性能。臨床上選用何種材料作封閉劑，一般是基于材料的封閉性能以及材料的生物相容性兩方面考慮。本實(shí)驗(yàn)通過國外常用的Cortisomol糊劑與傳統(tǒng)的氧化鋅丁香油糊劑采用美藍(lán)染色法對其根尖孔的封閉能力進(jìn)行對比研究。結(jié)果陽性對照組美藍(lán)滲入明顯，說明亞甲藍(lán)有良好的滲透和染色作用，陰性對照組無美藍(lán)滲入，表明本實(shí)驗(yàn)所用保護(hù)劑封閉能力良好，從而保證該實(shí)驗(yàn)的可靠性。超級秘書網(wǎng)

Cortisomol糊劑與氧化鋅丁香油糊劑同屬氧化鋅類根管封閉劑，已知氧化鋅不溶于水，顆粒細(xì)?。?lt;200目），流動(dòng)性好凝固時(shí)間長（24h），具有一定的X線阻射力，因而其根尖封閉效能頗佳。它是目前臨床應(yīng)用最廣泛的根充糊劑，療效肯定，以它作對照組對于評價(jià)一種新的根充糊劑是合適的。Cortisomol根充材料主要含1.1%醋酸強(qiáng)的松龍鹽、多聚甲醛、氧化鋅、紅色氧化劑及賦形劑，其工作時(shí)間為30min，凝固時(shí)間2~6h，溶解度≤3%。同國內(nèi)常用的氧化鋅丁香油糊劑相比，主要增加了醋酸強(qiáng)的松龍鹽和賦形劑成份。醋酸強(qiáng)的松龍為糖皮質(zhì)類激素，根管內(nèi)用藥可減輕根充術(shù)后根尖周圍的腫脹和疼痛；多聚甲醛可使根尖殘留的牙髓組織干燥硬化和消毒根管；紅色氧化劑便于清楚操作；而其賦形劑可增強(qiáng)糊劑與根管壁的粘附，從而增強(qiáng)糊劑封閉根尖孔的能力。Cortisomol根管糊劑不可吸收，吸水性小，能長期固定在根管中［7］，也可防止因微滲漏引起的根尖周炎的復(fù)發(fā)。從以上兩組實(shí)驗(yàn)結(jié)果也說明了Cortisomol糊劑對根尖孔的封閉性能優(yōu)于氧化鋅丁香油糊劑?？梢奀ortisomol這種新型的根管糊劑具有止痛、根管消毒、減輕炎癥反應(yīng)［7］和根管封閉性能好等多種作用，是一種較理想的根管充填劑。

參考文獻(xiàn)

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［3］常世民，韓培彥，邢汝東，等.CORTISOMOL根管糊劑根充術(shù)后反應(yīng)的近期療效觀察［J］.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2004，3（1）∶19

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［5］劉敏川綜述，鄧惠妹審校.根管充填方法的現(xiàn)狀述評［J］.國外醫(yī)學(xué)，1995，22（5）∶285

篇7

【論文摘要】近年來分子生物學(xué)技術(shù)以及其它高、新技術(shù)在病理領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，同樣作為體育界的基礎(chǔ)研究學(xué)科運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)的發(fā)展已經(jīng)不能滿足簡單的宏觀的研究，越來越多的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)以及病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)在運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)廣泛應(yīng)用，尤其是組織病理學(xué)技術(shù)中定位技術(shù)，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學(xué)常用的定位技術(shù)的方法進(jìn)行綜述。

1免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

隨著免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的廣泛應(yīng)用，病理學(xué)研究產(chǎn)生了劃時(shí)代的飛躍。免疫組織化學(xué)是病理學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的方法，是在蛋白質(zhì)水平用各種特異性抗體檢測細(xì)胞內(nèi)各種抗原物質(zhì)。根據(jù)標(biāo)記物的不同，免疫組織化學(xué)技術(shù)可分為免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫金-銀細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、親和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫電子顯微鏡技術(shù)等。

1.1免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟免疫組化技術(shù)是在組織化學(xué)的方法上結(jié)合免疫學(xué)的理論和技術(shù)發(fā)展起來的一門新技術(shù)。其原理是利用免疫學(xué)的核心——抗原體特異性結(jié)合的原理，用標(biāo)記抗體追蹤抗原，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對其顏色進(jìn)行觀察，以達(dá)到檢測抗原物的目的[1]。

1.2免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：①特異性強(qiáng)，免疫組化中抗體與組織細(xì)胞中的抗原的結(jié)合是特異的。如白細(xì)胞共同抗原（LCA）顯示淋巴細(xì)胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素—生物素（ABC）法和鏈酶素—過氧化物酶連接（SP）法的出現(xiàn)，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達(dá)到了上千、上萬，甚至上億倍，使免疫組化技術(shù)更加可靠。③定位準(zhǔn)確，由于抗原抗體的結(jié)合是特異的，因而免疫組化技術(shù)可在組織和細(xì)胞內(nèi)準(zhǔn)確定位，對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，將形態(tài)與功能相結(jié)合，對疾病進(jìn)行深入的研究。

2原位雜交實(shí)驗(yàn)技術(shù)

原位雜交是將組織化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合來檢測合定位核酸的技術(shù)。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來檢測細(xì)胞內(nèi)是否存在欲檢測物質(zhì)的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個(gè)層次的檢驗(yàn)方法。根據(jù)所選探針和待測靶序列的不同，核酸原位雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。

2.1原位雜交技術(shù)的應(yīng)用原位雜交由于不需要從待測組織中提取核酸，可完好的保存組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，將形態(tài)學(xué)與基因功能活動(dòng)的變化相結(jié)合進(jìn)行多層面的研究。主要應(yīng)用：①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位可用于基因圖譜、基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；②感染組織病毒DNA/RNA的檢測和定位；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的監(jiān)測；④基因在染色體上的定位；⑤檢測染色體的變化；⑥間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究。

2.2原位雜交技術(shù)與免疫組化的比較

2.2.1兩者的區(qū)別原位雜交與免疫組化染色技術(shù)相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測的功能，且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測對象是抗原，機(jī)制是抗原-抗體的特異性結(jié)合，是蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補(bǔ)配對的原則與待測靶序列結(jié)合，是DNA或mRNA水平的檢測。從實(shí)驗(yàn)方法來看，免疫組化染色操作相對簡單，成本相對較低，受外界因素的影響相對??；原位雜交技術(shù)無論從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，還是從實(shí)際操作上均較免疫組化染色復(fù)雜，成本的高低與試劑的種類和來源密切相關(guān)。一般而言，直接選用商品化的標(biāo)記探測和檢測試劑盒的實(shí)驗(yàn)成本較高；熒光標(biāo)記探針較非熒光標(biāo)記探針的成本高，對樣本及實(shí)驗(yàn)條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。

2.2.2免疫組化與原位雜交雙標(biāo)技術(shù)雙標(biāo)技術(shù)是在同一張組織切片上標(biāo)記兩種不同的抗體或同時(shí)應(yīng)用兩種不同的檢測手段，如免疫組化和原位雜交技術(shù)，在不同層次來檢測同一細(xì)胞上某些物質(zhì)的表達(dá)是否有相關(guān)性的一種實(shí)驗(yàn)方法。與傳統(tǒng)的單項(xiàng)檢測相比，雙標(biāo)記具有無可比擬的優(yōu)越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時(shí)間或空間的樣本誤差。實(shí)驗(yàn)方法上先進(jìn)行原位雜交會(huì)減少免疫組化過程中對待測DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進(jìn)行原位雜交后進(jìn)行免疫組化標(biāo)記[2，3]。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問題就是：①所用的實(shí)驗(yàn)設(shè)備必須經(jīng)DEPC水浸泡或200℃烤箱過夜，操作時(shí)須帶口罩及手套；②當(dāng)雜交步驟完成后，切片必須認(rèn)真浸泡及長時(shí)間洗滌至少超過30min。③作免疫組化的各步驟時(shí)間均須適當(dāng)延長，以增加抗原抗體間的結(jié)合，楊青春等人研究發(fā)現(xiàn)每個(gè)步驟均延長2～3倍時(shí)間。④免疫組化顯色后不需要用蘇木精復(fù)染，以免遮蓋核信號。

參考文獻(xiàn)

[1]紀(jì)小龍，施作霖.診斷免疫組織化學(xué)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1997.5.

篇8

【關(guān)鍵詞】 胃癌；癌前病變；診斷；染色內(nèi)鏡檢查；胃鏡

胃癌（gastric carcinoma）是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤， 在我國惡性腫瘤中排第二位[1]。我國新發(fā)胃癌病例占全球新發(fā)病例的40%以上， 并且大部分已處于進(jìn)展期， 手術(shù)及化療效果不佳[2]。因此早期診斷胃癌及癌前病變具有重要的臨床意義， 胃鏡檢查在確定早期胃癌及癌前病變中具有重要價(jià)值。近年來隨著內(nèi)鏡技術(shù)的普及和各種內(nèi)鏡下方法的開展， 內(nèi)鏡已經(jīng)成為診斷消化道腫瘤的首選方法， 電子染色內(nèi)鏡是近年來發(fā)明的內(nèi)鏡方法， 為了探討電子染色內(nèi)鏡下診斷胃癌及癌前期病變的臨床價(jià)值， 作者經(jīng)過多年臨床研究， 取得了滿意的結(jié)果， 現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2012年1月～2014年1月在本院進(jìn)行診治的內(nèi)鏡下黏膜異常的240例檢查者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有檢查者均進(jìn)行胃鏡活檢；②檢查前未行放化療和免疫治療；③自愿納入本研究者 。觀察組108例予以染色后活檢，對照組132例單純活檢。觀察組108例中男70例， 女38例；年齡32～80歲， 平均年齡（55.48±12.39）歲。對照組132例中男79例， 女53例；年齡33～81歲， 平均年齡（56.79±11.45）歲。兩組檢查者的性別、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 兩組檢查者均進(jìn)行常規(guī)胃鏡的準(zhǔn)備與操作， 檢查前常規(guī)用咽部、一般情況告知、擺放， 檢查前除準(zhǔn)備常規(guī)胃鏡下治療器械外， 需禁食水6 h。完善血常規(guī)、血型、出凝血時(shí)間、肝腎功能等治療。麻醉前麻醉師、內(nèi)鏡操作醫(yī)師、護(hù)理人員均需要詳細(xì)了解病史， 注意有無禁忌證及物過敏史。有休克癥狀者檢查前糾正休克。測量血壓、脈搏、呼吸， 發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)處理。如有假牙應(yīng)取下， 以防窒息[5]。插鏡過程中保持患者頭部位置不動(dòng)， 應(yīng)密切觀察檢查者的反應(yīng)， 當(dāng)胃鏡到達(dá)咽喉部時(shí)， 囑患者做吞咽動(dòng)作， 以助胃鏡通過咽喉部， 但不可將唾液咽下， 以免嗆咳， 如有嗆咳， 說明可能有唾液流入氣管， 應(yīng)將患者的左嘴角輕輕下壓， 協(xié)助患者將唾液排出。當(dāng)檢查者出現(xiàn)惡心不適時(shí)， 應(yīng)告知檢查者深呼吸， 放松全身肌肉。觀察組用清水將病變部位及周圍胃黏膜沖洗干凈后，經(jīng)活檢孔插入噴灑管，將配制的0.5%盧戈氏靛胭液均勻噴灑于病變黏膜，0.5 h后，于著色區(qū)域行胃黏膜活檢并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。對照組直接鉗取胃黏膜行活檢。

2 結(jié)果

觀察組108例檢查者中， 病檢證實(shí)有腸上皮化生46例，不典型增生30例，早期胃癌8例（均經(jīng)手術(shù)及術(shù)后標(biāo)本病理檢查證實(shí)限于黏膜層且無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）。對照組檢查者中，病變組織病理檢查顯示：腸上皮化生34例，不典型增生20例，未檢出早期胃癌。觀察組癌前病變和早期胃癌共檢出84例，檢出率77.78%（84/108）；對照組癌前病變和早期胃癌共檢出54例，檢出率40.91%（54/132）。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

胃癌是消化系統(tǒng)最常見惡性腫瘤， 在惡性腫瘤中排第二位， 病死率排第三位， 大部分患者發(fā)現(xiàn)胃癌并采取治療措施時(shí)已經(jīng)處于晚期狀態(tài)， 治療效果不佳。目前， 胃癌的治療是以手術(shù)為主、放化療等治療為輔的綜合治療， 雖然隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展， 胃癌的手術(shù)切除率不斷得到提高， 但是其術(shù)后復(fù)發(fā)率高、死亡率仍然是醫(yī)生經(jīng)常面臨的問題[3]。因此如何采取積極的措施早期診斷胃癌及癌前病變具有深遠(yuǎn)的意義。

內(nèi)鏡是近代醫(yī)學(xué)史中一種重要的診斷和治療器械。隨著科技的進(jìn)步， 內(nèi)鏡已從原來單一的診斷功能發(fā)展到借助高頻電刀、氬氣、微波、激光等手段來摘除、電凝人體的贅生物以及直接進(jìn)入腔內(nèi)止血等為目的的治療性內(nèi)鏡。目前外科正逐步形成以內(nèi)鏡為治療工具的“微創(chuàng)外科學(xué)”[4]。

胃鏡檢查是臨床常用的檢查手術(shù)， 胃鏡診療技術(shù)目的通過胃鏡檢查直視胃部疾病， 以確定病變的部位及性質(zhì)， 取活體組織檢查以協(xié)助診斷。臨床適應(yīng)證包括上消化道癥狀， 需做檢查以確診者；不明原因上消化道出血者；疑上消化道腫瘤者；需隨診的病變， 如潰瘍病、萎縮性胃炎、息肉病等。但臨床操作中也要注意禁忌證， 比如有嚴(yán)重心臟病、嚴(yán)重肺部疾病、上消化道大出血生命體征不穩(wěn)者、精神不正常不能配合檢查者、咽部急性炎癥者、明顯主動(dòng)脈瘤、腐蝕性食管炎急性期或者疑有胃腸穿孔者[5]。

本研究采用電子染色內(nèi)鏡檢查作為觀察組研究方式， 此方法是通過內(nèi)鏡將色素噴灑在胃黏膜上， 作內(nèi)鏡檢查， 稱染色內(nèi)鏡， 通過本研究發(fā)現(xiàn)， 觀察組癌前病變和早期胃癌共檢出84例，檢出率77.78%（84/108）；對照組癌前病變和早期胃癌共檢出54例，檢出率40.90%（54/132）。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

綜上所述， 盡管染色內(nèi)鏡可很大程度上提高早期胃癌和胃黏膜不典型增生的診斷率， 但常規(guī)活檢因取材部位及深度等原因， 還是有一定的漏診率， 黏膜下層的整個(gè)病灶， 并進(jìn)行病理學(xué)檢查， 彌補(bǔ)了常規(guī)活檢的不足， 減少漏診率。因此， 對于有經(jīng)驗(yàn)內(nèi)鏡醫(yī)師診斷的早期胃癌， 進(jìn)行染色內(nèi)鏡并行完整病理活檢對于診斷早期胃癌有重要意義。

參考文獻(xiàn)

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[2] 陳麗娜，吳云林.內(nèi)鏡染色在早期胃癌診斷中的應(yīng)用.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2007，27（5）：613-616.

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篇9

關(guān)鍵詞：胸腹水沉渣石蠟包埋；免疫組化；診斷

胸腹水是臨床上一種常見的并發(fā)癥，臨床上對其進(jìn)行診斷時(shí)往往采用體液細(xì)胞學(xué)檢測法，但這種檢測方法的診斷率相對較低。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取于2013年9月～2015年9月我院各個(gè)科室送檢的胸腹水標(biāo)本共260例。其中，患者的年齡41～79歲，平均年齡（56.67±3.29）歲。依據(jù)患者的臨床資料與標(biāo)本的鏡下形態(tài)選取惡性及存在惡性傾向的體液標(biāo)本共56例。

1.2方法

1.2.1切片制作方法 將選取的56例標(biāo)本進(jìn)行離心，然后舍棄上清液，吸取沉淀物后，將其制作成1張液基細(xì)胞涂片，采用濾紙將剩余的沉淀物進(jìn)行包埋，包埋完成后進(jìn)行組織學(xué)標(biāo)號，并將其與組織標(biāo)本放置于脫水機(jī)中，按照組織標(biāo)本的制作方法對其進(jìn)行固定、脫水、透明以及浸蠟，制成石蠟組織塊后，再將其制成3～4μm的切片。

1.2.2免疫組化染色方法 檢測方法使用Elivision法，抗體采用CEA、CK-H以及CKlow等，試劑采用福州邁新生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。染色方法具體如下：首先，將切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟至水，洗液采用PBS。然后，滴入3%的過氧化氫，于常溫下將其放置10min，并依據(jù)相關(guān)要求進(jìn)行抗原修復(fù)操作，再滴入一抗，將其放置于4℃的冰箱中過夜。最后，向其滴入二抗，DAB顯色后，再采用蘇木素進(jìn)行復(fù)染，并用鹽酸乙醇對其進(jìn)行分化，并將切片脫水、封片。

1.3評價(jià)指標(biāo) 陽性的評判標(biāo)準(zhǔn)主要包括三種，分別是：①CEA、D2-40以及Tg等部分腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)著色；②CK-H、CKlow、Calretin以及CA125腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜著色；③Ki-67、TTF-1腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核著色。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對上述數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)采取率（%），組間率對比采取χ2檢驗(yàn)，對比以P

2 結(jié)果

2.1兩種方法檢測胸腹水的檢出率比較分析 沉渣石蠟包埋聯(lián)合免疫組化檢測法檢出的陽性率為82.1%，高于液基細(xì)胞學(xué)檢測法，組間比較有差異（P

2.2免疫組化檢測法結(jié)果分析 沉渣石蠟包埋聯(lián)合免疫組化檢測法檢出的46例患者中，其中，表現(xiàn)為肺腺癌的患者共21例，表現(xiàn)為鱗癌的患者共10例，表現(xiàn)為卵巢癌的患者共4例，表現(xiàn)為胃腺癌的患者共9例，表現(xiàn)為間皮瘤的患者共2例。見表2。

3 討論

胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢查是臨床上一種常用的檢測方法，該方法具有簡便、準(zhǔn)確性高等特點(diǎn)，是臨床上診斷良惡性胸腹水的一種常用方法[1]。近幾年，隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，膜式超薄液基細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)以及沉渣石蠟包埋法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于胸腹水細(xì)胞的涂片中，其中，采用沉渣石蠟包埋法制作切片，不僅可以提升切片的制作數(shù)量，保存細(xì)胞的完整性，提升臨床檢出率，同時(shí)還能夠?qū)ζ溥M(jìn)行免疫組化染色，在此基礎(chǔ)上還可以聯(lián)合使用抗體檢測，從而能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞進(jìn)行有效分類[2]。

目前，臨床上采用胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)，診斷較為困難的是對間皮細(xì)胞與癌細(xì)胞的區(qū)分，特別是當(dāng)間皮細(xì)胞退化后，由于不具有典型性，更易被誤診[3]。針對較難確診的患者，可以進(jìn)一步采用免疫組化聯(lián)合抗體法進(jìn)行檢查。臨床實(shí)踐中，我們依據(jù)單個(gè)抗體對不同的腫瘤細(xì)胞具有不同的特異性與敏感性的原理，在此基礎(chǔ)上，根據(jù)胸腹水沉渣石蠟包埋切片的結(jié)果選取相應(yīng)的抗體，進(jìn)而采用多種抗體進(jìn)行聯(lián)合檢測[4]。目前，在胸腹水細(xì)胞學(xué)涂片中，我們常常采用Calretin、CK-H、CEA以及TTF-1四種抗體進(jìn)行腫瘤的鑒別。其中，Calretin屬于一種鈣結(jié)合蛋白，該物質(zhì)主要存在于人體的神經(jīng)元以及其他細(xì)胞中，常見于間皮瘤中，而在腺癌中則較少見，因此，該物質(zhì)可以作為惡性間皮瘤的標(biāo)志物[5]；CK-H屬于一種高分子量的細(xì)胞角蛋白，往往在人體皮膚的基底細(xì)胞、棘層細(xì)胞以及部分前列腺基底細(xì)胞等細(xì)胞層均有所表達(dá)，既可以作為鱗癌與腺癌之間鑒別的標(biāo)志物，同時(shí)還可以作為間皮瘤與腺癌之間鑒別的標(biāo)志物[6]；CEA主要存在于人體各種腺皮上皮源性腫瘤中，特別是在各種腺癌細(xì)胞中廣泛存在，其中，該物質(zhì)在人體的胃腸道腺癌中具有較高的陽性率，而在人體的體腔間皮細(xì)胞中則不存在，且在間皮瘤與增生性間皮細(xì)胞中呈現(xiàn)為不表達(dá)或者是低表達(dá)，因此，該物質(zhì)是腺癌與間皮癌之間鑒別的重要標(biāo)志[7]；TTF-1主要存在于原發(fā)性肺腺癌中，且對其具有較高的敏感性與特異性，因此，該物質(zhì)可以作為原發(fā)性肺腺癌與轉(zhuǎn)移性肺腺癌之間鑒別的標(biāo)志物，同時(shí)該物質(zhì)對于肺原發(fā)性低分化腺癌與鱗癌也具有一定的鑒別價(jià)值[8]。臨床上采用CKlow、CK-H、CEA以及TTF-1一組抗體聯(lián)合應(yīng)用作為鱗癌與腺癌的鑒別，同時(shí)還可以作為腫瘤細(xì)胞來源于肺臟的依據(jù)。Calretin呈現(xiàn)為陽性表達(dá)說明患者為間皮瘤間皮增生，但是對其良惡性的具體判斷還需依據(jù)患者腫瘤細(xì)胞的異型性、核分裂數(shù)等進(jìn)行綜合判斷。CKlow與CK-H均呈現(xiàn)為陰性，但TTF-1呈現(xiàn)為陽性，則應(yīng)該考慮患者為肺未分化癌。

綜上所述，在胸腹水沉渣石蠟包埋中聯(lián)合應(yīng)用免疫組化進(jìn)行檢查，能夠提升臨床檢出率，確定腫瘤細(xì)胞的來源及其發(fā)病部位，為臨床治療提供參考意見。

參考文獻(xiàn)：

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[2]黃金長，張功亮，郭廣秀，等.細(xì)胞塊石蠟包埋及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)在胸腹水細(xì)胞病理學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，31（5）：489-490.

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[6]陳學(xué)敬，周立娟，曲楊，等.沉渣包埋聯(lián)合免疫組化在胸水轉(zhuǎn)移性肺腺癌與胸膜惡性間皮瘤鑒別診斷中的應(yīng)用[J].診斷病理學(xué)雜志，2014，21（5）：263-266.

篇10

1資料與方法

1．1方法

1．1．1分離培養(yǎng)hBMSCs在志愿者髂前上棘抽取骨髓10mL。采集的骨髓用生理鹽水1∶1稀釋，密度為1．077g／L的淋巴細(xì)胞分離液2000r／min離心15min，收集白膜層，生理鹽水漂洗2次。以含10％FBS的L－DMEM作為完全培養(yǎng)液，以一定密度接種于75mL培養(yǎng)瓶中，置于37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，3d后換液去除非貼壁細(xì)胞，以后每2～3d換液1次，待細(xì)胞達(dá)80％融合時(shí)，用0．25％胰酶＋0．02％ED－TA消化，以1∶3的比例傳代培養(yǎng)。

1．1．2流式檢測hBMSCs表型hBMSCs用0．25％胰酶＋0．02％EDTA消化，1000r／min離心5min，生理鹽水洗滌，制備成1×106／mL單細(xì)胞懸液，分別加入熒光標(biāo)記的鼠抗人CD34、CD29、CD105抗體，設(shè)置空白對照，避光冰育30min，生理鹽水洗滌3次后重懸細(xì)胞，上流式細(xì)胞儀檢測。

1．1．3鑒定hBMSCs多向分化潛能以4×103／cm2密度將第3代hBMSCs接種于6孔板，每孔2mL。（1）成脂誘導(dǎo)及鑒定：細(xì)胞達(dá)到完全融合后4d，實(shí)驗(yàn)組加入脂肪誘導(dǎo)液（H－DMEM，10％FCS，0．5mmol／LIBMX，10μg／mL牛胰島素，0．2mmol／Lindomethacin，1μmol／L地塞米松）誘導(dǎo)3d，再用脂肪保持液（H－DMEM，10μg／mL牛胰島素，10％FCS）處理1d，循環(huán)3次，再用脂肪保持液處理2d。對照組加入含10％FCS的H－DMEM，每3天換液1次。2周后油紅O染色鑒定。（2）成骨誘導(dǎo)及鑒定：細(xì)胞達(dá)到60％～70％融合后，實(shí)驗(yàn)組加入成骨細(xì)胞誘導(dǎo)液（OS，含1×10－7mol／L地塞米松，10mmol／L甘油磷酸鈉，50g／mL維生素C），對照組加入L－DMEM完全培養(yǎng)液，置培養(yǎng)箱中，每2天換液1次，第21天終止誘導(dǎo)。茜素紅S染色鑒定。

1．1．4分組處理hBMSCs采用0．25％胰酶＋0．02％EDTA消化hBMSCs，用不同輸注液制備單細(xì)胞懸液。根據(jù)輸注液不同分為生理鹽水組（9g／L氯化鈉注射液）、糖鹽組（50g／L葡萄糖氯化鈉注射液）、清蛋白組（含5％人血清蛋白的氯化鈉注射液）。分別在4℃和25℃溫度條件下置于不同時(shí)間點(diǎn)（0．5、1．0、2．0、4．0，6．0h）后進(jìn)行以下檢測。（1）取90μL細(xì)胞懸液與10μL胎盤藍(lán)混勻，3min內(nèi)計(jì)數(shù)活細(xì)胞（未染色）和死細(xì)胞（染色），測定細(xì)胞存活率。（2）另取1×106／mL細(xì)胞行流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表型CD34、CD29、CD105。（3）再將不同分組細(xì)胞懸液，1000r／min離心5min，采用含10％FBS的L－DMEM作為完全培養(yǎng)液，以1×103／mL密度接種于96孔板，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，置于37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)7d。采用CCK－8在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定450nm各孔波長吸光度（A）值，以時(shí)間為橫軸，A值為縱軸繪制生長曲線。

1．2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17．0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果用x±s表示。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組均數(shù)間比較，采用單因素方差分析進(jìn)行多組均數(shù)間比較，采用LSD最小顯著差數(shù)法進(jìn)行均數(shù)間兩兩比較。P＜0．05表示差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2．1hBMSCs形態(tài)觀察原代hBMSCs貼壁后，呈圓形，散在分布。3d后完全換液，去除未貼壁細(xì)胞，可見少量分散短梭形貼壁細(xì)胞。第14天時(shí)，貼壁細(xì)胞融合成單層，細(xì)胞排列有明顯方向性，呈漩渦狀。見圖。

2．2hBMSCs的表型流式檢測第3代hBMSCs的表型發(fā)現(xiàn)，CD105陽性率98．7％，CD29陽性率97．7％，表達(dá)率極高；CD34陽性率為2．9％，表達(dá)呈陰性。

2．3hBMSCs分化能力鑒定hBMSCs成脂誘導(dǎo)2周后，光學(xué)顯微鏡下可見大量融合成串珠狀的圓形脂滴。油紅O染色可見被染成橙紅色的脂滴，顯示分離的hBMSCs可被誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化。成骨誘導(dǎo)3周，細(xì)胞逐漸融合，失去細(xì)胞結(jié)構(gòu)，14d左右出現(xiàn)明顯鈣結(jié)節(jié)，茜素紅S染色后可見散在大量橘紅色鈣結(jié)節(jié)，顯示培養(yǎng)的hBMSCs可被誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞分化。

2．4hBMSCs存活率檢測在5個(gè)時(shí)間點(diǎn)（0．5、1．0、2．0、4．0、6．0h）對保存在25℃、4℃的3個(gè)實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞存活率檢測，結(jié)果見表1～2。結(jié)果顯示，糖鹽組細(xì)胞存活率最低，25℃保存4．0h時(shí)只有約10％細(xì)胞存活；而清蛋白組細(xì)胞存活率最高，25℃保存2．0h時(shí)清蛋白組細(xì)胞存活率仍可達(dá)90％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。25℃和4℃條件下，保存0．5h時(shí)，生理鹽水組及清蛋白組細(xì)胞存活率都超過90％，隨著保存時(shí)間延長，各組細(xì)胞存活率逐漸下降。

2．5不同分組細(xì)胞表型檢測25℃和4℃條件下，在5個(gè)時(shí)間點(diǎn)（0．5、1．0、2．0、4．0、6．0h）對3個(gè)實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞表型檢測，結(jié)果見表3～5。結(jié)果表明，不同輸注液、保存溫度及保存時(shí)間對細(xì)胞表型影響差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。

2．6細(xì)胞生長曲線測定將不同分組處理后的細(xì)胞，采用L－DMEM完全培養(yǎng)液重新接種培養(yǎng)，檢測細(xì)胞增殖能力，結(jié)果見圖2（見《國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站“論文附件”）。50g／L葡萄糖氯化鈉注射液組保存的細(xì)胞增殖能力最差，保存4h后細(xì)胞失去貼壁和生長能力（無細(xì)胞貼壁無法完成生長曲線）。5％人血清清蛋白氯化鈉注射液組細(xì)胞增殖能力比9g／L氯化鈉注射液組細(xì)胞增殖能力強(qiáng)。同一組細(xì)胞4℃條件下不同時(shí)間點(diǎn)的增殖能力比25℃條件下強(qiáng)。隨著保存時(shí)間延長，各組細(xì)胞增殖能力逐漸下降。

3討論

hBMSCs是來源于骨髓的間質(zhì)干細(xì)胞，不僅能分化成肝細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞［4］、血管內(nèi)皮細(xì)胞［5］、不同類型的皮膚細(xì)胞［6］、神經(jīng)樣［7］細(xì)胞，還具有免疫調(diào)節(jié)、炎癥趨化等特性，使其在肝臟疾病、血管外科、燒傷整形外科及神經(jīng)損傷等疾病治療中發(fā)揮越來越重要的作用。干細(xì)胞注射液從實(shí)驗(yàn)室制備到運(yùn)送至病房回輸給患者具有一定時(shí)空距離，特別是隨著異地移植病例的增多，如何有效地保存干細(xì)胞注射液，對于細(xì)胞移植的臨床應(yīng)用非常重要。目前相關(guān)研究更多集中于將干細(xì)胞冷凍于－80℃或液氮等進(jìn)行長期保存的探討［8－9］，有關(guān)短時(shí)保存條件對干細(xì)胞生存和生長影響的研究不多。本實(shí)驗(yàn)探討了幾種臨床常用注射液在不同溫度下短時(shí)保存干細(xì)胞對細(xì)胞存活和增殖能力等狀況的影響。形態(tài)學(xué)觀察顯示，培養(yǎng)的細(xì)胞呈均一長梭形，輻射狀生長；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表型顯示CD34表達(dá)陰性，CD29、CD105表達(dá)陽性；成脂誘導(dǎo)后出現(xiàn)大量脂滴，成骨誘導(dǎo)后出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié)，表明該細(xì)胞確為hBMSCs。