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請?zhí)垥? /></p> <h2>篇1</h2> <p> 【摘要】 【目的】觀察穴位經(jīng)皮給藥藥貼對實驗性哮喘豚鼠血清中環(huán)氧化酶2(COX2)水平的影響?！痉椒ā繉?8只豚鼠隨機分為正常對照組、模型組、地塞米松組和經(jīng)皮給藥藥貼組，每組各12只。除正常對照組外，各組豚鼠均采用卵白蛋白致敏法復(fù)制實驗性過敏性哮喘模型。經(jīng)皮給藥藥貼組采用大椎、肺俞、腎俞穴位貼敷治療，地塞米松組采用腹腔注射地塞米松05 mg/kg治療。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組豚鼠血清COX2水平，采用蘇木素—伊紅染色檢測各組豚鼠支氣管肺組織病理形態(tài)變化。【結(jié)果】模型組豚鼠血清COX2水平顯著高于正常對照組(P</p> <p> 【關(guān)鍵詞】 經(jīng)皮給藥藥貼/治療應(yīng)用;支氣管哮喘/穴位療法;環(huán)氧化酶2/血液;疾病模型，動物;豚鼠</p> <p> 哮喘是以多種炎癥基因表達增加或異常表達為特征，由多種炎癥細胞(嗜酸性粒細胞、T淋巴細胞、肥大細胞、巨噬細胞等)和氣道結(jié)構(gòu)細胞(上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞等)及細胞組分(細胞因子、化學(xué)因子、黏附分子、酶類和受體)參與的一種氣道慢性炎癥性疾患[1]。環(huán)氧化酶2(COX2)是一種誘導(dǎo)酶，它能促進細菌脂多糖、炎性細胞因子、生長因子和腫瘤啟動子的產(chǎn)生，與炎癥反應(yīng)及腫瘤發(fā)生相關(guān) [2] 。在哮喘的病理生理過程中COX2可能起了關(guān)鍵作用 [3] 。</p> <p> 近年來，應(yīng)用穴位貼敷療法治療哮喘的研究較多[4] ，經(jīng)皮給藥系統(tǒng)是藥物經(jīng)由皮膚吸收進入人體血液循環(huán)，并達到有效血藥濃度、實現(xiàn)疾病治療或預(yù)防的一類貼劑(或貼片) [5] 。本實驗根據(jù)清代《張氏醫(yī)通》中記載的消喘膏加用麻黃為處方，利用現(xiàn)代藥物提純和經(jīng)皮給藥技術(shù)制作成一種藥貼，觀察穴位貼敷經(jīng)皮給藥藥貼對哮喘模型豚鼠血清COX2水平的影響，并探討其治療哮喘的療效機制?，F(xiàn)報道如下。</p> <p> 1材料與方法</p> <p> 11實驗藥物、儀器及試劑雞卵白蛋白(美國Sigma公司，批號：A5253)由廣州市威佳科技有限公司提供，地塞米松注射液由廣州白云山制藥廠提供，經(jīng)皮給藥藥貼藥物質(zhì)量比為：白芥子∶麻黃∶延胡索∶甘遂∶細辛=2∶2∶2∶1∶1，由南方醫(yī)科大學(xué)中藥制劑實驗室制備。WH22000型超聲霧化儀由廣東粵華公司生產(chǎn)，Multiskan II ELISA檢測儀由芬蘭生產(chǎn)，LD42A型水平離心機由北京醫(yī)用離心機廠生產(chǎn)，BX50生物組織顯微鏡由日本Olympus公司生產(chǎn)，EG1140石蠟包埋機、TP1020生物組織自動脫水機、RM2050石蠟切片機均為德國徠卡公司產(chǎn)品，COX2酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒由武漢博士德生物有限公司提供(產(chǎn)品編號為EK0603)。</p> <p> 12實驗動物分組及造模48只成年豚鼠，雌雄各半，體質(zhì)量200～250 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供(動物質(zhì)量合格證號:0031706)。所有豚鼠隨機分為正常對照組、模型組、經(jīng)皮給藥藥貼組和地塞米松組，每組各12只?？刂剖覝?，各組在相同條件下飼養(yǎng)，先將動物飼養(yǎng)3 d適應(yīng)環(huán)境后開始造模。第4天，除正常對照組外，其他各組均采用雞卵白蛋白致敏，常規(guī)消毒后一次性腹腔注射100 g/L卵白蛋白生理鹽水1 mL，使豚鼠處于致敏狀態(tài)[6]。第18天開始，將致敏的豚鼠置于密閉透明的塑料盒內(nèi)，給予10 g/L卵白蛋白生理鹽水混懸液霧化吸入加以激發(fā)，每次30 s，1次/d，連續(xù)14 d，以腹式呼吸明顯，呼吸頻率加快且節(jié)律不整，活動減少等癥狀為誘喘成功。正常對照組以生理鹽水代替卵白蛋白生理鹽水，其致敏及誘喘時間同造模組。</p> <p> 13治療方法于哮喘發(fā)作次日開始治療：地塞米松組采用腹腔注射地塞米松05 mg/kg，隔天治療1次，共治療7次。經(jīng)皮給藥藥貼組進行穴位貼敷治療，穴位選擇：大椎穴、肺俞穴(雙)、腎俞穴(雙)[7]。具體方法：將豚鼠頸背部穴位處用寵物電剪刀剪毛，剪毛范圍：縱向大椎至腎俞，橫向脊柱兩側(cè)各旁開15 cm，用大塊膠布將藥物敷貼固定于穴位處。每次敷藥6 h，治療時間與次數(shù)同地塞米松組。模型組造模成功后令其自然恢復(fù)，正常對照組不給予任何干預(yù)治療。</p> <p> 14樣本制備在末次誘喘后2～4 h內(nèi)，給豚鼠稱體質(zhì)量，用30 g/L戊巴比妥鈉按50 mg/kg腹腔注射麻醉豚鼠，迅速斷頭取血，每只取5 mL，室溫放置2 h后，3 000 r/min離心15 min，取上清液，放冰箱-20 ℃保存待測。同時迅速打開胸腔，暴露肺及心臟，常規(guī)取支氣管肺組織，避免鉗夾組織引起組織受壓影響觀察，取材部位：右中下肺取一橫切面，包括肺門。所取組織經(jīng)100 g/L多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋和切片(厚4 μm)待測。</p> <p> 15檢測方法采用ELISA法定量檢測各組豚鼠血清中COX2水平，嚴格按照試劑盒說明的方法和要求操作。采用光鏡觀察各組經(jīng)蘇木素—伊紅(HE)染色切片的支氣管肺組織形態(tài)變化。</p> <p> 16統(tǒng)計學(xué)方法所有實驗數(shù)據(jù)均在SPSS 130上建立數(shù)據(jù)庫、進行數(shù)據(jù)錄入與統(tǒng)計分析。各組間差異采用單向方差分析(OneWay ANOVA)，方差齊用LSD檢驗，方差不齊用Tamhanes檢驗，檢驗水平α=005。</p> <p> 2結(jié)果</p> <p> 21動物數(shù)量實驗結(jié)束后，共剩豚鼠30只，每組隨機取6只，共24只納入結(jié)果分析。</p> <p> 22各組豚鼠血清COX2水平比較表1結(jié)果顯示：模型組豚鼠血清COX2水平顯著高于正常對照組(P</p> <p> 23各組支氣管肺組織形態(tài)觀察結(jié)果正常對照組支氣管黏膜上皮完整，平滑肌無明顯的增厚，肺泡壁清晰完整，間隔形態(tài)正常，無明顯的炎癥細胞表1各組豚鼠血清COX2水平比較(x±s)浸潤。模型組支氣管管壁黏膜上皮細胞受損和脫落明顯，氣道壁不完整，黏膜下層炎癥明顯，氣道平滑肌增厚，膠原纖維增加，管腔狹窄，氣道腔內(nèi)黏液分泌增多，黏液栓堵塞，氣道周圍嗜酸性粒細胞明顯增加，肺泡內(nèi)可見彌漫性慢性炎細胞浸潤、管腔變窄，肺泡基本上實變，充滿炎癥細胞，有肺大泡形成，肺泡間隔有明顯充血。地塞米松組支氣管黏膜上皮基本完整，管壁平滑肌層有輕度的增厚，間質(zhì)炎癥細胞較少，肺泡間隔基本完整，腔內(nèi)有少量的炎癥細胞，肺泡間隙輕度充血以及有少數(shù)的炎癥細胞浸潤。經(jīng)皮給藥藥貼組支氣管的黏膜上皮基本完整，平滑肌層有輕度的增厚，管周有少量的炎癥細胞，肺泡完整，間質(zhì)輕度充血，結(jié)果見圖1(彩圖見第317頁)。</p> <p> 3討論</p> <p> 支氣管哮喘(哮喘)是當(dāng)今世界最常見的慢性疾病，其病理生理改變以氣道慢性非特異性炎癥、氣道反應(yīng)性增高及氣道重建為主要特征，三者相互作用、互相影響 [8] 。</p> <p> 哮喘的治療目前國內(nèi)外首選消除非特異炎癥的糖皮質(zhì)激素，但由于副作用大、成癮性強及易反復(fù)發(fā)作等缺點的存在，使其有效應(yīng)用受到一定限制。穴位敷貼治療哮喘則是在傳統(tǒng)中醫(yī)針灸理論指導(dǎo)下發(fā)揮其獨特療效的 [9] 。 穴位敷貼給藥為一古老的中醫(yī)外治法，具有不經(jīng)消化系統(tǒng)破壞和肝臟分解，維持較長時間且穩(wěn)定的血藥濃度，從而使藥物作用時間長而穩(wěn)定的優(yōu)點。而且由于穴位給藥，藥物成分通過經(jīng)絡(luò)感傳影響多層次的生理功能，它們之間可能產(chǎn)生相互激發(fā)和協(xié)調(diào)作用，導(dǎo)致生理上的放大效應(yīng)，使藥物的外治效果可能優(yōu)于內(nèi)服 [10-11] 。本實驗光鏡觀察到的結(jié)果從病理角度驗證了穴位貼敷經(jīng)皮給藥藥貼治療豚鼠哮喘的有效性。</p> <p> 哮喘的本質(zhì)是炎性反應(yīng)，來自體液直接反映炎癥存在情況的細胞因子或炎癥介質(zhì)成為近年來的研究重點，如炎性反應(yīng)環(huán)節(jié)中起著關(guān)鍵作用的COX2，已被視為快速炎癥反應(yīng)的重要標志之一 [12] 。 COX2主要存在于氣道上皮細胞和平滑肌細胞，生理狀態(tài)下它幾乎不被表達，只有在炎性細胞因子或炎性介質(zhì)將細胞激活的情況下才被表達[13]。哮喘患者氣道黏膜中有大量的單核—巨噬細胞、嗜酸性粒細胞及中性粒細胞浸潤，被激活后可產(chǎn)生大量的COX2，COX2是一種炎性酶，它的表達可誘導(dǎo)多種炎癥介質(zhì)的表達，如前列腺素E2(PGE2)、白細胞介素6(IL6)、IL8、IL18等，這些炎癥介質(zhì)又加重了炎癥反應(yīng)，從而誘發(fā)哮喘或使哮喘加重，而且COX2的過度表達與氣道重塑和氣道氣流阻塞程度加重有關(guān) [14-17] 。</p> <p> 本研究結(jié)果顯示，模型組豚鼠血清COX2水平顯著高于正常對照組(P</p> <p> 參考文獻</p> <p> [1]Barnes P J，Godfrey S.Asthma therapy[M].London：Martin Dunitz，1998：L1-L22.</p> <p> [2]支玉香，張宏譽.102例阿司匹林性哮喘病例分析[J].臨床內(nèi)科雜志，2004，21(2)：105.</p> <p> [3]蔡芳芳，楊炯，倪嵐.糖皮質(zhì)激素對大鼠哮喘模型肺組織環(huán)氧化酶基因表達的影響[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2006，22(5)：504.</p> <p> [4]李廣濤.“冬病夏治”貼敷治療哮喘68例[J].實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2003，17(5)：379.</p> <p> [5]梁旭霞，黃小平，陳興興，等.均勻設(shè)計法篩選蟾酥貼劑的透皮吸收促進劑[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報，2008，24(3)：212.</p> <p> [6]方厚華.醫(yī)學(xué)實驗?zāi)Ｐ蛣游颷M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2002：106-107.</p> <p> 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Cigarette smoke induces cyclooxygenase2 and microsomal prostaglandin E2 synthase in human lung fibroblasts：implications for lung inflammation and cancer[J]. 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