導語：如何才能寫好一篇仰望大樹，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

每當我們感慨大樹的偉岸，每當我們羨慕大樹的沉穩(wěn)，每當我們沉醉在大樹的綠蔭中，可曾想到，在他仍然是一顆小小的種子時，經(jīng)歷了多少風雨，歷經(jīng)了多少磨難，才能擁有今天的光輝?？稍溃秋柦?jīng)風霜的樹干是如何形成的，它是怎么將自己的根深深埋在地下的。他看見清了人世間的滄桑。

這一天，我站在一棵大樹面前，抬頭仰望這位老者，我仿佛看見了大樹這千百年來的歷程，仿佛看見了他的一生。時光倒流，回到這棵樹還是一顆種子的時候。一顆小小的種子，不知被誰給遺棄，掉落在這荒野之中，這片荒涼的地方?jīng)]有其他的生命，除了那顆種子。這只是一片荒地，沒有充足的水源，沒有松軟的土壤，唯一有的，就只有過度的陽光。種子會渴死，這是他的結局。但這顆種子并沒有就此屈服，他不要這樣的結局，他要改變自己的命運，他沖破了那層保護他的表皮，他發(fā)芽了，但這只是他生活的開始，為了活下去，他必須加自己的根伸長，希望那些長長的根能找到水源，這并不是件容易的事，這里是荒漠，在荒漠中找水，可以說是天方夜譚。幸運的是，他成功了，他成功找到一些水，他知道，這些水是不夠它活下去的，他只能繼續(xù)尋找，直到找到充足的水源，它要活下去?？赡苁撬男拍罡袆恿松咸欤娴某晒α?，漸漸地，這片荒野變成了一塊綠州，到處都是生機盎然的綠色。漸漸地，這里有了人家，夏天，人們總是在它的樹蔭下乘涼。

沒有哪棵樹是種下去就是大樹的，只有懂得堅持，擁有堅定的信念，再付出大量的努力，才能長成參天大樹，才能為人世間做出貢獻。樹的生活亦是如此，人生又何嘗不是如此呢？

篇2

1. 重新調整養(yǎng)殖網(wǎng)箱的布局

根據(jù)產(chǎn)量計劃確定養(yǎng)殖網(wǎng)箱的規(guī)模。通過當?shù)卣M織，科技人員闡明養(yǎng)殖網(wǎng)箱合理布局的科學道理，廣泛動員養(yǎng)殖戶按比例拆減70%的現(xiàn)有網(wǎng)箱，并根據(jù)（NY/T 5061―2002）《無公害食品 大黃魚養(yǎng)殖技術規(guī)范》標準，進行重新布局。

2. 加強網(wǎng)箱區(qū)環(huán)境的日常保護

（1）每個養(yǎng)殖區(qū)網(wǎng)箱連續(xù)養(yǎng)殖兩年后，應統(tǒng)一收上擋流裝置及網(wǎng)箱，休養(yǎng)3～6個月。

（2）根據(jù)放置網(wǎng)箱地點的淺與深，養(yǎng)殖4～5年后，可在預留的空閑海區(qū)內移動網(wǎng)箱位置。并對原網(wǎng)箱點的底質進行清理，以利底質生態(tài)環(huán)境的修復。

（3）網(wǎng)箱區(qū)的環(huán)境衛(wèi)生：一是“漁排”上的人糞尿等生活污水、廢棄物、殘餌、垃圾、病死魚、油污等應收集上岸進行無害化處理。二是換洗網(wǎng)箱應在彩條布箱內消毒后沖洗，并把沖洗網(wǎng)箱的污水進行收集和處理。三是“漁排”要有防油污設施。

3. 推廣魚、貝、藻間養(yǎng)的生態(tài)養(yǎng)殖模式

在留足網(wǎng)箱之間的通道和周邊空間的前提下，采用海水魚網(wǎng)箱、貝類、藻類養(yǎng)殖區(qū)間隔布局。貝類可濾食水體中懸浮的殘餌顆粒和浮游植物而生長良好，并使海水變得清潔；藻類可吸收魚類和貝類排放的氮、磷而生長良好，且藻類光合作用產(chǎn)生的氧，可增加水體中的溶氧量，保證魚、貝生命活動需要，促進魚、貝類產(chǎn)生的污染物的氧化，還可生產(chǎn)出優(yōu)質貝、藻產(chǎn)品。如此在網(wǎng)箱區(qū)一帶形成一個互利互補的良性生態(tài)群落，既提高海區(qū)養(yǎng)殖效率，又可以改善海區(qū)生態(tài)環(huán)境。

4. 使用優(yōu)質、適口人工配合顆粒飼料并適量投喂

優(yōu)質、適口的人工配合顆粒飼料能夠提高飼料利用率，降低餌料系數(shù)，減少殘餌量。應以優(yōu)質的浮性人工配合飼料代替鮮雜魚肉投喂，既可保護水產(chǎn)資源，又可減少殘餌對網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)的污染。

二、為海水魚網(wǎng)箱養(yǎng)殖提供種質優(yōu)良與體質健壯的苗種

1. 苗種的種質要求

使用原種或經(jīng)選育的生長快、個體大的良種親魚；改變目前由于濫用小個體親魚進行近親繁殖，造成海水魚養(yǎng)殖種類個體小型化、抗病力下降和性成熟提前等種質退化現(xiàn)象。

2. 苗種的體質要求

推廣低密度生態(tài)式培育，大黃魚全長2厘米魚苗的出苗量宜控制在每立方米5000尾以下（其他海水魚養(yǎng)殖種類還要更低些），做到育苗階段不用藥或少用藥，魚苗生長快、活力好、無病害，成活率高。

網(wǎng)箱養(yǎng)殖的海水魚魚種放養(yǎng)密度應適當，不是密度越大越好。在網(wǎng)箱區(qū)水較深、布局合理、水流暢通和水質良好條件下，養(yǎng)殖的大黃魚可按每平方米單產(chǎn)105公斤或每立方米單產(chǎn)15公斤、成活率90%的計劃，以及魚種和養(yǎng)成魚的規(guī)格來投放魚種。

三、病害的防控

目前網(wǎng)箱養(yǎng)殖海水魚的主要疾病是由病毒性、細菌性、寄生性、敵害生物、餌料引起的及其他引起的。防治魚病，應以防為主。

1. 苗種檢疫

（1）苗種的調運或投放前要進行檢驗、檢疫，防止病原體帶入。（2）有病的苗種應在原地進行治療、處理，痊愈并殺滅了傳染性病原后才能調運與投放，從源頭上切斷病原傳播。

2. 病害防治綜合措施

篇3

大菱鲆屬于蝶型目，鲆科、菱鲆屬，性格溫順。大菱鲆身體有的呈扁平狀，有的近似圓形，雙眼位置在身體左側，也有部分魚類眼睛左側部分呈現(xiàn)褐色，帶有圈點狀黑色素及少量皮刺，沒有眼睛的一側光滑通常呈白色，頭部和尾鰭都比較小，魚身部位肉質特別肥厚，內臟占有的比例很小。因此，也有人叫它“多寶魚”。此種魚類一般分布于大西洋東側歐洲沿岸，在北歐南部直至北非北部均是它的繁殖地帶。大菱鲆養(yǎng)殖對水質要求較高，外海水要進行過濾、殺菌，若抽取地下海水可直接入養(yǎng)殖池使用。

2.大菱鲆養(yǎng)殖前的準備工作

2.1魚池的選擇。魚池的面積一般為30m2至60m2為最佳，池深通常在80cm左右即可。養(yǎng)魚池最好建設在水質優(yōu)良未受到污染還能打出海水井的沿岸地帶和岸段。

2.2水質的要求。為保證水質，可先用少量魚苗試養(yǎng)，魚苗正常時再進行大規(guī)模養(yǎng)殖。地下海水除溫度優(yōu)勢外，其他各項指標均低于自然海水，另外，在殖區(qū)附近水域應符合國家漁業(yè)二級水質標準，在保證不含有有害重金屬離子和硫化物不超過0.02mg/ml，以及總大腸桿菌數(shù)小于6000個/ml，鹽度在20以上的情況下，做到無污染源，不含泥沙，水質清澈。另外，地下海水在進入養(yǎng)魚池之前必須進行瀑氣處理。如果大菱鲆長期生活在不經(jīng)過瀑氣處理的水環(huán)境中，有害物質的長期積累會造成魚體的慢性中毒，或導致魚體生長速度緩慢，體質虛弱和成活率降低，嚴重的時候容易爆發(fā)魚病，影響?zhàn)B殖戶的經(jīng)濟效益。

2.3光照要求。由于大菱鲆屬于底棲魚類，所以，其光照不能太強和光照時間太長，最佳以500Lux至1500Lux為宜。光照節(jié)律要與自然光相同，光線需要柔和、均勻、不刺眼為宜。

2.4鹽度要求。大菱鲆養(yǎng)殖的適應鹽度范圍比較寬松，耐受鹽度范圍為12%至40%之間均可，最適宜鹽度為25%至30%。

2.5水溫。大菱鲆是冷水性魚類，耐受溫度的極限范圍在3℃至23℃之間，最佳養(yǎng)殖水溫為15℃至18℃，14℃至19℃水溫條件下生長較為快速，所以，本文建設在此溫度下養(yǎng)殖為宜。

2.6pH：養(yǎng)殖水體的pH應高于7.3，通常保持在7.6至8.2之間即可。

2.7溶解氧：≥6mg/L。

3.種苗的選購及運輸管理

3.1在購買種苗前，首先要仔細考察了解育苗場的親魚種質和技術水平，在選購時應盡量選擇大規(guī)格苗種，大規(guī)格種苗對環(huán)境的適應能力較強，養(yǎng)殖成活率高，保證入池養(yǎng)殖的苗種規(guī)格至少達5cm，達8cm至10cm規(guī)格的種苗更好。（1）在魚種選擇時，應選擇體形完整、無損傷、無畸形、雙眼位于身體左側、體色正常、有眼側呈青褐色、背呈沙色、體表光滑，無傷痕、無發(fā)紅癥狀、無炎癥和寄生蟲、在池底受到外界刺激或驚嚇時能快速游走的苗種為最佳。（2）同一育苗場培育出同一批苗種中規(guī)格較大的苗種推薦選購，多批次育苗場多次選購回來的魚苗，會出現(xiàn)魚體大小不一現(xiàn)象，不要選擇在養(yǎng)殖過程中因各種因素導致生長緩慢的較小魚種，該魚種容易發(fā)育成為"老頭魚"，給養(yǎng)殖成本帶來浪費。

3.2種苗的運輸管理。種苗運輸前應停食12至24h。通常使用尼龍袋充氧裝運，運輸時間最好控制在20h以內。首先將袋內灌入1/3左右砂濾海水，然后種苗計數(shù)裝入袋內(10L的包裝袋，每袋可裝全長5cm至10cm的種苗50尾至100尾;全長15cm的種苗，每袋可裝30尾至50尾。)，然后充氧、封口，將魚苗袋裝入泡沫箱或紙箱中進行運輸。在種苗運輸過程中，應做好充足的準備工作，如水溫偏高或運輸距離較遠時，應在運輸袋中加入少量冰塊。以免魚體受傷、碰撞、破袋、漏水、漏氣、氧氣不足等現(xiàn)象發(fā)生。到達目的地后，在開箱、解包入池時，需先測試一下溫差和鹽度，最好用15至25ppm土霉素或呋喃西林連續(xù)藥浴3至5天，每天1至2次，每次1h至2h。也可投喂劑量為150至160mg土霉素/kg/天，以增加魚苗免疫力，提高魚苗抗病能力。

4.餌料加工與投喂

4.1飼料加工。因大菱鲆是冷水性底棲生活的魚類，活動不多，對蛋白質的需求量很高，所以，在飼料原料的選擇上一定要選擇新鮮的雜魚與飼料配合喂養(yǎng)。通常將50%或60%鮮雜魚絞成魚漿，配加上40%或50%大菱鲆專用粉末飼料，再根據(jù)不同的生長階段添加3%至5%魚油即可。值得注意的是，鮮雜魚一定要清洗干凈后方才可加工，堅決杜絕使用變質、有異味的雜魚。

4.2餌料的投放。投餌量要根據(jù)魚平時攝食情況來確定，在投餌時要多意觀察魚的攝食情況和攝食量變化，投喂原則是不能有殘餌，如果發(fā)現(xiàn)攝食不良現(xiàn)象，應及時找出原因，準確分析水質問題以及及時進行對各種常魚病的判斷。在魚體重未達到100g時，投餌次數(shù)可在4至6次/天為宜，體重達到150g以上，每日投餌次數(shù)減少到2或3次/天。盡量避免使用濕性飼料，建議使用專用干性顆粒飼料，干性配合飼料對水質污染輕，有利于減少病害發(fā)生。

篇4

我愛看戲，愛聽音樂。生活、工作、學習雖然很緊張，但并不枯燥單調，精神上也很舒暢，這與多興趣的調節(jié)作用不無關系。我愛書法、繪畫、詩詞、篆刻等，利用這些愛好，可以減少疲勞，使大腦得到適當休息，此亦養(yǎng)神之一法也。

調節(jié)衣著注意保暖

人之生機，隨春夏而生、長，隨秋冬而收、藏，這種周期性活動，是一種生命的規(guī)律，故應之而行，則人體安和。我在日常生活中十分注意氣候變化，隨時調節(jié)衣著，尤其注意保溫。若偶然感冒，則立即服藥令其盡快治愈。若遷延時日，一則拖延難愈，二則?？烧T發(fā)他病。

另外，每次出行都多帶些衣服，可防天氣突然變冷。《素問?生氣通天論》別強調陽氣的重要意義。因陽氣一傷，則防衛(wèi)無力；陽氣一失，則生機立危；陽氣竭盡，則孤陰難存。故需注意加以保護。

知足常樂不求奢華

所謂知足，非謂不求上進，不求提高，不求發(fā)展也。而是說對一般的現(xiàn)實生活條件，自當滿足。我之一生，從不放棄奮斗目標，也不去追求不必要的奢望，這就是我在物質生活方面堅守的原則。因此，也就不會有過多的煩惱。憂患與安樂，是人生不可避免的矛盾，問題在于認真對待和妥善處理。

忙里偷閑合理安排

人之生也，瞬息而逝，欲有所為，忙亦必然。然而人的精力與體力畢竟有限，這就需合理安排，才有可能既不傷體亦不勞神。我在青少年時期，農(nóng)忙季節(jié)下田勞動，都帶一本書在休息時讀。工作忙碌時，休息時間可讀提神的書；閱讀專業(yè)書勞累時，可以改換專業(yè)外的書。日久自成習慣，既不勞累，又可休息。

張燦，男，漢族，1928年7月出生，山東榮成人?，F(xiàn)任山東中醫(yī)藥大學終身教授、博士生導師。國醫(yī)大師，全國老中醫(yī)藥專家學術經(jīng)驗繼承工作指導老師。

穴位按摩保護心腦血管

程凱

中老年人的血管相對較為脆弱，管腔多數(shù)都有狹窄，心腦血管會變得較細，因此平時多做做經(jīng)紹養(yǎng)生操，可以保護心腦血管。

1　保護腦血管

壓人迎雙手拇指在人迎穴壓迫移動，先輕后重，緩緩加力，手下感到脈搏跳動時停留3秒鐘，如此重復5次，以局部有酸脹感向內傳導為佳。

位置：仰頭的時候，在喉結外側大約3厘米的地方能摸到動脈搏動，此處即是人迎穴。

功效：雙向調血壓，高者降，低者升。

掐太沖用拇指指尖用力在太沖穴掐按，直到有酸痛的感覺為止，有空即可操作，不拘時間和次數(shù)。

位置：在腳背上，第一、二腳趾趾縫之間的凹陷處。

功效：降血壓，預防腦卒中。搓兩耳用拇指和食指分別來回捻搓兩耳耳郭，范圍越大越好，直至全耳發(fā)熱。

位置：整個耳朵。

功效：提神醒腦，延年益壽。耳朵是整個身體的縮影，搓耳朵相當于按摩全身。

2　保護心血管

拔極泉右手食、中兩指并攏，深入左側腋窩內，在腋窩的正中處，用力向上頂，并來回橫向撥動，會有明顯的酸麻感，并向肩、背、胸等處發(fā)散。

位置：腋窩頂端即是極泉穴。

功效：快速緩解心悸，預防心肌梗死(左側效果好于右側)。

壓內關一手大拇指按在內關穴上，食指按在對側外關穴處，相對用力，旋轉式按壓，以有酸脹感為好，持續(xù)一兩分鐘，然后換手操作。

位置：手臂內側，掌橫紋中點直上三橫指，兩筋中間即是內關穴；手臂外側，腕背橫紋中點上三橫指，兩筋之間是外關穴。

功效：寬胸理氣，益氣安神。

點神門一手拇指指尖放在神門穴上，用力點揉5分鐘，然后換手操作。每天1次，最好在睡覺前進行。

位置：手腕內側，掌橫紋上靠近小指的一端，肌腱內側即是神門穴。

功效：寧心安神，降壓止痛。

以上的經(jīng)絡按摩操作簡便，效果明顯，是我們茶余飯后很好的養(yǎng)生方法。如果能堅持下去，可減少心腦血管疾病發(fā)作概率，給自己增添一份信心，也給子女帶去一份安心。

健康提示：

1　晨練要小心

晨起鍛煉的時間不宜太早，尤其是寒冷時晨練不僅不能起到保健作用，反而會成為疾病的誘發(fā)因素。早晨起來的時候氣溫還很低，室內外溫差較大，既容易感受風寒，也容易引起血管劇烈收縮。清晨接近地面的空氣污染嚴重，容易誘發(fā)哮喘和呼吸系統(tǒng)疾病，所以建議大家最好在太陽升起以后，或是干脆選擇下午或者晚上再去戶外運動，以練太極拳、太極劍及散步為主。

篇5

【關鍵詞】  nmda受體亞單位1;細胞凋亡;阿爾茨海默病;大鼠;海馬

【摘要】  目的 探討n甲基d天門冬氨酸受體(nmethyldaspartate receptor，nmdar，nr)亞單位1在阿爾茨海默病(ad)樣大鼠海馬的表達及其與細胞凋亡的關系。方法 以aβ140和alcl3雙干預的方法建立ad樣大鼠模型。應用免疫組織化學法檢測nr1在ad樣大鼠海馬的表達，tunel法檢測ad樣大鼠海馬細胞凋亡情況，并觀察二者的關系。結果 nr1在ad樣大鼠海馬各區(qū)的表達均升高，與對照組相比有顯著性差異(p<0.05)，區(qū)間比較未見顯著性差異。凋亡陽性細胞在ad樣大鼠海馬各區(qū)均顯著增多尤以ca1區(qū)為甚、其次為齒狀回，與對照組比，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。結論 nr1在ad樣大鼠海馬表現(xiàn)為病理性的高表達且這種病理性高表達和ad樣大鼠海馬的細胞凋亡以及選擇性易損傷現(xiàn)象之間可能存在著某種特定的關系。

【關鍵詞】  nmda受體亞單位1;細胞凋亡;阿爾茨海默病;大鼠;海馬

阿爾茨海默病(ad)發(fā)病機制的β淀粉樣蛋白(aβ)級聯(lián)反應假說認為，aβ的生成和蓄積是ad發(fā)病的中心環(huán)節(jié)〔1～3〕。氧化損傷，谷氨酸(glu)興奮毒性，老年斑(sp)和神經(jīng)原纖維纏結(nft)的形成以及細胞死亡級聯(lián)反應的激活等，都被視為是繼發(fā)于aβ生成和聚積的后續(xù)事件〔4，5〕。ad可能與活動亢進的神經(jīng)元有關，并且這些活動亢進的神經(jīng)元最密集地集中在病變腦組織中淀粉樣斑塊沉積處的附近并且與疾病的癥狀相關聯(lián)〔6〕。glu興奮毒性通路在這個假說的數(shù)條主要信號通路中可能處于極其重要的地位，可能是引發(fā)ad患者神經(jīng)細胞變性和死亡的一種重要機制。病理性胞漿ca2+超載主要是由n甲基d天門冬氨酸受體(nmethyldaspartate receptor，nmdar，nr)所介導，而nr1是ca2+通道的主要調節(jié)者，是nmdar介導glu興奮毒性的主要組分〔7〕。目前對ad樣細胞凋亡的確切機制仍不明確，至于nr1與ad樣細胞凋亡的關系尚未見文獻報道。本課題應用免疫組化和tunel染色的方法，研究nr1在ad樣大鼠海馬的表達及其與細胞凋亡的關系。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器

aβ140，alcl3(美國 sigma);山羊多克隆抗nr1抗體(美國 santa cruz);總抗山羊igg抗體(英國 abcam);濃縮型二氨基聯(lián)苯胺(dab)試劑盒(北京中杉);原位末端凋亡法(tunel)試劑盒(德國 roche);堿性磷酸酶顯色試劑盒(bcip/nbt，上海碧云天)。sr5r型腦立體定位儀(日本成茂);石蠟切片機(德國 leica);顯微攝影系統(tǒng)(日本奧林巴斯);圖像分析軟件(美國 media cybernetics)。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物及分組

健康雄性老年sd大鼠45只，體重570～620 g，徐州醫(yī)學院實驗動物中心提供(實驗動物許可證號：蘇syxk20020038)。實驗大鼠經(jīng)訓練和篩選后，隨機分為ad模型組、生理鹽水(ns)組和正常對照組(nc)，每組15只。

1.2.2 大鼠訓練和篩選

所有參與實驗的大鼠用morris水迷宮系統(tǒng)進行訓練和篩選。4次/d，連續(xù)5 d。將大鼠面向池壁分別從4個入水點放入水中，記錄其在2 min內找到平臺的時間(逃避潛伏期)。如果在2 min內大鼠未能找到平臺，則由實驗者將其牽引至平臺上并讓其停留20 s，再放回籠中，始終不能找到平臺的大鼠將被剔除。

1.2.3 ad樣大鼠模型制備

模型組大鼠用10%水合氯醛(0.5 ml/100 g)麻醉后，將其固定在鼠腦立體定位儀上，參照文獻〔8〕選取側腦室立體定位坐標(以前囟為參照，旁開1.4 mm，后0.8 mm，深3.6 mm)。將微量注射器緩緩插入到定位好的坐標，緩慢注射0.5 mg/ml的aβ14030 μl〔aβ140用0.01 mol/l磷酸鹽緩沖液(pbs)配制成0.5 mg/ml的溶液〕，在5 min內注射完，留針10 min;然后縫合皮膚并用碘伏消毒。ns組在側腦室內注射等量生理鹽水。單籠飼養(yǎng)直至大鼠完全清醒，晝夜(12/12 h)節(jié)律光照，自由進食飲水，室溫控制在20℃～25℃。從第5天開始，以100 mg/kg的劑量隔日腹腔注射3% alcl3(ns配置)，持續(xù)4 w。

1.2.4 灌注固定及切片制備

行為學測試后，以10%水合氯醛(0.5 ml/100 g體重)腹腔麻醉大鼠，經(jīng)心升主動脈插管灌注固定。取包含海馬的腦塊常規(guī)后固定、梯度酒精脫水、二甲苯透明，然后浸蠟、石蠟包埋。取包埋之腦塊作連續(xù)冠狀切片，片厚6 μm;切片分6套，分別進行nr1免疫組化、tunel、剛果紅及蘇木素伊紅(he)染色和陰性對照染色。

1.2.5 免疫組織化學染色

切片常規(guī)脫蠟、復水后，入二乙胺乙四酸(edta)抗原修復液行微波修復，加3%h2o2(室溫、10 min)，水洗，10%兔血清(室溫1 h)，加一抗(1∶100，以含0.3% triton x100的0.01 mol/l pbs稀釋，4℃ 48 h)，水洗，加生物素化兔抗山羊igg(1∶200，37℃ 30 min)，水洗，滴加辣根過氧化物酶標記鏈霉卵白素液(1∶200，37℃ 30 min)，水洗，以dab顯色。陰性對照以一抗稀釋液替代一抗，其余步驟相同。

1.2.6 tunel反應

切片常規(guī)脫蠟、復水后，入0.01 mol/l檸檬酸鹽緩沖液(ph 6.0)的抗原修復液行微波修復，水洗，配置tunel反應混合液(tdt∶熒光素標記的dutp=1∶9混合，即5 μl tdt + 熒光素標記的dutp 45 μl)，加tunel反應混合液10 μl(蓋上專用蓋玻片，暗濕盒中反應，37℃ 1 h)，水洗，加10 μl converterap(蓋上專用蓋玻片，暗濕盒中反應，37℃ 30 min)，水洗，以bcip/nbt顯色。常規(guī)脫水、透明、封片后鏡檢、拍照。陰性對照以熒光素標記的dutp替代tunel反應混合液，其余步驟相同。

1.3 圖像分析與統(tǒng)計學分析

使用image j圖像分析軟件分別測量各區(qū)的nr1陽性細胞和凋亡陽性細胞的灰度值，以各測量點灰度值減去相應背景灰度值后的平均值作為海馬各區(qū)的最終灰度值。采用spss16.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)以x±s表示。多個樣本均數(shù)的比較采用雙因素方差分析，組間比較采用t檢驗，多組與對照組比較采用最小顯著差法。

2 結 果

2.1 nr1在ad樣大鼠海馬的表達

nr1免疫組化反應陽性細胞以胞膜著色為主、呈棕黃色，胞質淡然，有時可見核仁。與nc組和ns組相比，nr1在ad樣大鼠海馬各區(qū)的表達均顯著增高，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。與ns組相比，nr1在ad樣大鼠海馬ca1區(qū)、ca3區(qū)和dg區(qū)的增高幅度依次為150.21%、139.75%和136.72%;區(qū)間比較，增高的幅度雖有差異，但無統(tǒng)計學意義。見圖1，圖2。

2.2 ad樣大鼠海馬細胞凋亡的檢測

tunel染色顯示，在ad樣大鼠海馬各區(qū)均可見明顯的凋亡陽性細胞，以ca1區(qū)最為顯著，其次是dg區(qū)，再次是ca3區(qū)。凋亡陽性細胞的胞核呈深藍色、形態(tài)不規(guī)則，有的固縮、有的裂解。與nc組和ns組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。ns組和nc組雖可見零星的凋亡陽性細胞，但應屬于生理現(xiàn)象，且二者比較差異無顯著性。見圖3，圖4。陰性對照腦片未見nr1免疫組化反應陽性細胞和tunel染色陽性細胞。與ad組比較：1)p<0.05，下圖同圖1 大鼠海馬各區(qū)nr1免疫反應陽性細胞灰度值比較( x±s,n=5)圖2 大鼠海馬各區(qū)nr1免疫反應陽性細胞圖片(sabc，×100)圖3 大鼠海馬各區(qū)凋亡陽性細胞染色強度的比較(x±s,n=5)圖4 大鼠海馬各區(qū)凋亡陽性細胞染色圖片(tunel，×100)

3 討 論

海馬被認為是學習記憶的結構基礎，海馬功能障礙主要表現(xiàn)為特征性的學習和記憶功能的丟失，這與ad患者的主要臨床癥狀和特征相吻合〔9，10〕。因此，本文選擇海馬作為研究對象。在轉基因ad動物模型和ad患者腦內均發(fā)現(xiàn)cjun氨基末端激酶(jnk)信號通路被激活的證據(jù)，并認為這一途徑與aβ沉積有關〔11〕。細胞凋亡是ad樣細胞死亡的主要形式且此類細胞凋亡主要通過線粒體途徑實現(xiàn)〔12〕。但目前對ad樣細胞凋亡的確切機制仍不明確，胞漿內ca2+含量的增加被認為是細胞凋亡的啟動因素，是激活內源性核酸內切酶而降解dna的先決條件〔13，14〕，而病理性胞漿ca2+超載主要是由nmda受體所介導，nr1又是ca2+通道的主要調節(jié)者，故推測在ad樣大鼠海馬nr1的表達和ad樣細胞凋亡之間可能存在著某種內在的聯(lián)系。

研究發(fā)現(xiàn)，nr1在ad樣大鼠海馬呈病理性高表達;同時tunel染色顯示，在ad樣大鼠海馬可見明顯的凋亡陽性細胞，二者具有一致性。nr1高表達介導細胞凋亡的可能機制是，aβ和alcl3干預以后，誘導nr1表達增高，導致ca2+通道過度開放、胞漿ca2+超載〔15〕。超載的ca2+一方面可能與鈣調蛋白(cam)結合、導致鈣調蛋白激酶ⅱ(camkⅱ)過度磷酸化，磷酸化的camkⅱ又作用于nr1促進其通道的開放，從而構成正反饋環(huán)路并形成惡性循環(huán);另一方面，超載的ca2+將介導興奮毒性損傷并產(chǎn)生大量的自由基，導致氧化應激和氧化損傷，最終通過線粒體途徑導致細胞凋亡〔16〕。nmda受體尤其是和ca2+通道開放密切相關的nr1被認為是突觸可塑性以及海馬和皮質神經(jīng)元長時程增強(longterm potentiation，ltp)的主要調控者，而ltp的損害與中樞神經(jīng)退行性疾病密切相關〔17〕。因此認為，nr1的高表達除了導致細胞凋亡之外，還有可能通過影響海馬神經(jīng)元的ltp以及長時程抑制(longterm depression，ltd)的功能而導致ad樣大鼠的學習和記憶功能障礙。

研究還發(fā)現(xiàn)，nr1在ad樣大鼠海馬表達的增高幅度依次為ca1區(qū)>ca3區(qū)>dg;tunel染色顯示在ad樣大鼠海馬凋亡陽性細胞以ca1區(qū)為著、其次是dg、再次是ca3區(qū)。其中，nr1的高表達區(qū)間差異無統(tǒng)計學意義，這可能與ad的腦組織彌漫性病理學改變和損傷有關。ca1區(qū)和dg的凋亡陽性細胞比較有差異但無統(tǒng)計學意義，二者和ca3區(qū)相比皆具有顯著性差異。該結果與文獻報道的在ad轉基因小鼠出現(xiàn)明顯空間記憶障礙的同時，海馬ca1區(qū)和齒狀回的ltp受到顯著損傷相一致〔18〕。ca1區(qū)和dg的ltp抑制顯然與其細胞凋亡有關。海馬對ad具有較高的敏感性和高度選擇性，具有ad病變的基本特征，其中ca1區(qū)是海馬結構中與人類學習記憶關系最為密切的功能區(qū)，也是ad的選擇性易損區(qū)〔19〕，得到本研究的證實，而且本研究還為這種選擇性易損傷現(xiàn)象提供了一個合理的解釋，即這種選擇性易損傷可能與nr1的高表達相關。同時本研究還提示，dg很可能是ad樣大鼠海馬的另一個選擇性易損區(qū)，而ca3區(qū)則具有相對耐受性〔20〕。該結論尚未見相關文獻報道，具體原因和機制有待進一步深入研究。

本實驗結果提示，在ad樣大鼠海馬nr1的高表達很可能是誘導大鼠海馬ad樣細胞凋亡的主要原因。同時，nr1的高表達和細胞凋亡很可能是ad樣大鼠海馬ca1區(qū)和dg選擇性易損傷而ca3區(qū)相對耐受的一個重要原因。若在ad早期給予針對nr1的特異性阻斷劑也許能有效地防止ad樣細胞凋亡的發(fā)生，從而減緩ad的發(fā)展進程并改善患者的學習記憶功能。至于nr1高表達誘導ad樣細胞凋亡的具體路徑以及ad樣大鼠海馬選擇性易損傷的確切機制，有待從分子生物學角度和基因組學層面做進一步深入研究。

【參考文獻】

  　1 brookmeyer r，johnson e，zieglergraham k,et al.forecasting the global burden of alzheimer′s disease〔j〕.alzheimers dement，2007;3(3)：18691.

2 fernández ja，rojo l，kuljis ro,et al.the damage signals hypothesis of alzheimer′s disease pathogenesis〔j〕.j alzheimers dis，2008;14(3)：32933.

3 kowalska a.the betaamyloid cascade hypothesis：a sequence of events leading to neurodegeneration in alzheimer′s disease〔j〕.neurol neurochir pol，2004;38(5)：40511.

4 陳美婉，路 露，羅煥敏.阿爾茨海默病β淀粉樣蛋白的研究進展〔j〕.中國老年學雜志， 2007;27(11)：11125.

5 hynd mr，scott hl，dodd pr.glutamatemediated excitotoxicity and neurodegeneration in alzheimer′s disease〔j〕.neurochem int，2004;45(5)：58395.

6 busche ma,eichhoff g,adelerger h,et al.clusters of hyperactive neurons near amyloid plaques in a mouse model of alzheimer′s disease〔j〕. science，2008;321(5896)：16869.

7 dong xx，wang y，qin zh.molecular mechanisms of excitotoxicity and their relevance to pathogenesis of neurodegenerative diseases〔j〕.acta pharmacol sin，2009;30(4)：37987.

8 paxinos g，watson c.the rat brain in stereotaxic coordinates〔m〕. fourth edition.new york：elsevier science & technology press，2004.

9 howland jg，wang yt.synaptic plasticity in learning and memory：stress effects in the hippocampus〔j〕.prog brain res，2008;169(17)：14558.

10 莊 瑩,石 博，田 歆，等.人參皂苷rg2對alzheimer病模型大鼠學習記憶能力和老年斑形成的影響〔j〕.中國老年學雜志，2010;30(2)：2024.

11 ma ql，yang f，rosario er,et al.betaamyloid oligomers induce phosphorylation of tau and inactivation of insulin receptor substrate via cjun nterminal kinase signaling：suppression by omega3 fatty acids and curcumin〔j〕.j neurosci，2009;29(28)：907889.

12 swerdlow rh，khan sm.the alzheimer′s disease mitochondrial cascade hypothesis：an update〔j〕.exp neurol，2009;218(2)：30815.

13 kawahara m，negishikato m，sadakane y.calcium dyshomeostasis and neurotoxicity of alzheimer′s betaamyloid protein〔j〕.expert rev neurother，2009;9(5)：68193.

14 coppedè f，migliore l.dna damage and repair in alzheimer′s disease〔j〕.curr alzheimer res，2009;6(1)：3647.

15 exley c.the aluminiumamyloid cascade hypothesis and alzheimer′s disease〔j〕.subcell biochem，2005;38(17)：22534.

16 sultana r，butterfield da.oxidatively modified，mitochondriarelevant brain proteins in subjects with alzheimer disease and mild cognitive impairment〔j〕.j bioenerg biomembr，2009;41(5)：4416.

17 ondrejcak t，klyubin i，hu nw,et al.alzheimer′s disease amyloid betaprotein and synaptic function〔j〕.neuromolecular med，2010;12(1)：1326.

18 yamin g.nmda receptordependent signaling pathways that underlie amyloid betaprotein disruption of ltp in the hippocampus〔j〕.j neurosci res，2009;87(8)：172936.

篇6

1.湖北醫(yī)藥學院附屬十堰市太和醫(yī)院心胸外科，湖北十堰 442000；

2.湖北醫(yī)藥學院附屬十堰市人民醫(yī)院眼科，湖北十堰 442000

[摘要] 目的 觀察金櫻子（Rosa Laevigata Michx，RLM）對阿霉素（Doxorubicin，DOX）誘導心肌損傷的保護作用。 方法 Wistar大鼠隨機分為空白對照組（8只）、DOX模型組（15只）、RLM和DOX聯(lián)合用藥組（每個劑量組30只）?？瞻讓φ战M僅給予等體積生理鹽水，DOX模型組大鼠用DOX腹腔注射，使其累計劑量達15 mg/kg。聯(lián)合用藥組在DOX組基礎上每千克體重分別用1，2和5 g RLM灌胃。處理結束后，測量血清中天冬氨酸轉氨酶（aspartate transaminase，AST）、肌酸激酶（creatine kinase，CK-MB）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、總膽固醇（total cholesterol，TC）的含量，同時采用比色法測量還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）、丙二醛（myocardial lipid peroxide，MDA）、腫瘤壞死因子α（tumour necrosis factor-alpha，TNF-α）及caspase-3的含量。 結果 DOX能顯著增高大鼠血清中AST，LDH，CK-MB和TC水平，5 g/L RLM處理能將血清中AST降至（6.73±0.18）U/L，LDH降至（251.34±33.08）U/L，CK-MB降至（53.62±4.45）U/L，TC降至（67.82±9.47）mg/dL，與DOX模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。DOX也降低還原型GSH水平，能增加MDA，TNF-α及caspase-3的含量。而給予RLM處理后，每毫克組織中GSH水平增加至（1.06±0.11）mg/g，MDA降至（0.82±0.14）nmol/mg，TNF-α降至（3.49±0.05）pg/mg，caspase-3 OD值降至（0.83±0.02），與DOX模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。 結論 RLM通過其抗氧化、抗炎癥及抗凋亡機制發(fā)揮對DOX誘導的心肌毒性的保護作用。

[關鍵詞] 金櫻子；阿霉素；氧化應激

[中圖分類號] R965 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）03（a）-0015-04

Antioxidant and antiapoptosis effect of Rosa Laevigata Michx. on Doxorubicin-induced cardiac injury rats

LUO Weimin1 LIU Yuefeng2 LUO Xiangyu1 ZHANG Jun1

1.Department of Cardiothoracic Surgery， the Taihe Hospital of Shiyan Affiliated to Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China； 2.Department of Ophthalmology， the People's Hospital of Shiyan Affiliated to Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China

[Abstract] Objective To evaluate the cardioprotective effects of Rosa Laevigata Michx. （RLM） on DOX-induced heart injury in rats. Methods Wistar rats were randomized divided into control group， Doxorubicin model group and RLM groups. Rats in control group （n=8） were injected by normal saline injection， while the Doxorubicin model group were administrated by intraperitoneal injection （n=15） in a cumulative dose of 15 mg/kg for two weeks. For the RLM groups， 1， 2， 5 g/kg of ALM were given after DOX injection （n=30 in each dose group）. Activities and levels of aspartate transaminase （AST）， creatine phosphokinase isoenzyme （CK-MB）， lactate dehydrogenase （LDH）， total cholesterol （TC） and triglyceride （TG） in serum were detected. The level of reduced glutathione （GSH）， malondialdehyde （MDA）， tumour necrosis factor-alpha （TNF-α） and caspase-3 levels in cardiac tissue were detected by a colorimetric method. Results DOX significant increased the AST， CK-MB， LDH， and TC level in serum. 5 g/L RLM treatment could decrease AST to （6.73±0.18） U/L， LDH to （251.34±33.08） U/L， CK-MB to （53.62±4.45） U/L， TC to （67.82±9.47） mg/dL， there were statistical significances as compared with those in DOX modec group （P < 0.05）. DOX could also decrease the reduced GSH， and accumulation of MDA， TNF-α and caspase-3. After treatment with RLM， the content of GSH in each milligram of protein increased to （1.06±0.11） mg/g， MDA decreased to （0.82±0.14） nmol/mg， TNF-α decreased to （3.49±0.05） pg/mg， and decreased the OD value of caspase-3 OD to （0.83±0.02）. There were statistical significances as compared with those in DOX group （P < 0.05）. Conclusion RLM mediates their protective effect against DOX-induced cardiac injury through antioxidant， anti-inflammatory and antiapoptotic mechanisms.

[Key words] Rosa Laevigata Michx.； Doxorubicin； Oxidative stress

[基金項目] 湖北省十堰市科學技術研究與開發(fā)計劃（指導）項目（Ⅱ）（編號2009S48）。

[作者簡介] 羅衛(wèi)民（1978.3-），男，湖北十堰人，碩士；研究方向：心肌保護。

通訊作者

阿霉素（Doxorubicin，DOX） 是一種廣泛應用于腫瘤治療的蒽環(huán)類抗生素。盡管其對包括白血病在內的多種惡性腫瘤具有抑制作用，但其蓄積性不可逆性心肌病以及充血性心衰限制了其使用[1]。DOX導致的毒性心肌病原因很多，其中活性氧（reactive oxygen species，ROS）介導的心肌細胞凋亡是其重要機制之一[2]。因此，在DOX治療的同時預防性使用抗氧化藥物干預，有望降低其副作用[3]。近年來，某些藥用植物在心血管疾病的預防過程中具有一定的預防作用[4]，金櫻子為薔薇科金櫻子（Rosa Laevigata Michx.，RLM）的果實，研究發(fā)現(xiàn)它具有強大的抗氧化和清除自由基能力[5-6]。本研究旨在觀察RLM對DOX誘發(fā)的心臟毒性的保護作用。

1 材料與方法

1.1 主要實驗試劑

DOX購自意大利Pharmacia公司（批號：8NB002-A），血清天冬氨酸轉氨酶（aspartate transaminase，AST）檢測試劑盒購自Quimica Clinica Aplicada。血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）和肌酸激酶（creatine kinase，CK-MB）試劑盒為Stanbio產(chǎn)品。還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）及丙二醛（myocardial lipid peroxide，MDA）檢測試劑盒購自南京建成生物技術研究所。心肌腫瘤壞死因子α（tumour necrosis factor-alpha，TNF-α）ELISA試劑盒和caspase-3的比色測定試劑盒購自Quantikine。分析純試劑主要購自Sigma-Aldrich公司。

金櫻子購于十堰市中草藥材公司，經(jīng)去籽后用煎藥機進行熬煎。金櫻子的鑒定由湖北醫(yī)藥學院肖勝全教授完成，其提取液濃度為2.0 g/mL。

1.2 實驗分組

成年雄性Wistar大鼠由湖北醫(yī)藥學院實驗動物部提供，體重（250±5）g，在SPF環(huán)境下給予標準實驗室的水和食物飼養(yǎng)2周。大鼠隨機分成5組：空白對照組（8只），大鼠接受等體積的生理鹽水作為陰性對照；DOX模型組（15只），大鼠連續(xù)兩周每間隔48 h注射DOX（2.5 mg/kg，ip）共6次，使其累積劑量達15 mg/kg。RLM高、中、低劑量組（每組各30只）：在DOX模型組的基礎上，大鼠每日給予RLM（1、2、5 g/kg）灌胃，DOX停止后，持續(xù)RLM灌胃4周。

1.3 血清及心肌組織的獲取

大鼠處理結束后，獲取血液標本，8000×g離心10 min獲取血清用于測定TC、AST、LDH和CK-MB。隨后解剖大鼠，分離心臟，生理鹽水漂洗2次。將心臟組織剪切，制備成20%的勻漿后，二喹啉甲酸法測定其總蛋白濃度及AST、LDH、CK-MB活性、TC水平（mg/dL）。

1.4 心肌MDA測定

心臟勻漿與等體積2.3%的KCl混合，600×g，4℃離心15 min，獲取上清用于測定MDA。其原理基于脂質過氧化產(chǎn)物與硫代巴比妥酸發(fā)生過氧化反應，生成粉紅色的有色絡合物，從而用分光光度計以四甲氧基丙烷為標準品，532 nm和520 nm波長處測量其OD值。結果用nmol/mg表示。

1.5 心肌GSH測定

將等體積的心臟勻漿和預冷7.5%5-磺酸基水楊酸緩沖液以沉淀蛋白。隨后4℃，600×g離心10 min，獲取上清用于測量還原型GSH。其原理基于還原型GSH能與5，5-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）反應，產(chǎn)物在421 nm波長處能形成最大吸收峰。含量用mg/g組織表示。

1.6 TNF-α和caspase-3測定

50 mg心肌組織加入0.8 mL pH 7.4的裂解緩沖液中制成勻漿，10 000×g，4℃離心15 min。獲取上清用于TNF-α和caspase-3測定。其中TNF-α根據(jù)試劑盒提供的步驟進行，采用固相夾心ELISA法，四甲基聯(lián)苯胺（TMB）法顯色并于450 nm波長處測量其吸光度，用pg/mg蛋白表示。采用間接法測定caspase-3活性，基于caspase-3切除底物分子DEVD-pNA中的發(fā)光基團pNA，隨后在405 nm處用測量其吸光度，用OD值表示，從而間接反應其活性。

1.7 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示，并采用單因素方差分析數(shù)據(jù)，行t檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠血生化指標情況

心臟功能和血脂參數(shù)顯示，DOX注射后，血清AST、LDH、CK-MB、TC水平顯著增高。而同時給予RLM干預后，這些參數(shù)隨著RLM濃度的增高而不斷改善，見表1。

表1 不同濃度金櫻子處理對阿霉素心肌損傷大鼠

血生化指標的影響（x±s）

注：與空白對照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01；與DOX模型組比較，#P < 0.05；AST：血清天冬氨酸轉氨酶；LDH：乳酸脫氫酶；TC：血清總膽固醇；CK-MB：肌酸激酶；RLM：金櫻子；DOX：阿霉素

2.2 不同濃度RLM對心肌DOX處理后MDA含量的影響

與空白對照組相比，DOX處理組能誘導心肌MDA明顯增加（P < 0.01），給予不同濃度RLM處理后，心肌MDA含量隨之降低，其中DOX+5 g/kg RLM處理后，MDA含量降低最多[（0.82±0.14） nmol/mg]。見圖1。

1.空白對照組；2.DOX模型組；3.DOX+1 g/kg RLM；4.DOX+3 g/kg RLM；5.DOX+5 g/kg RLM；與空白對照組比較，#P < 0.01；與DOX模型組比較，*P < 0.05；RLM：金櫻子；DOX：阿霉素

圖1 RLM對血清丙二醛含量的影響

2.3 不同濃度RLM對DOX心肌毒性大鼠GSH含量的影響

與空白對照組相比，DOX組大鼠血清總GSH含量顯著降低（P < 0.01）。而同時給予不同濃度RLM處理后，GSH含量隨之升高。5 g/kg RLM處理大鼠后，GSH含量[（1.06±0.11） pg/g]接近對照組水平（圖2）。

1.空白對照組；2.DOX模型組；3.DOX+1 g/kg RLM；4.DOX+3 g/kg RLM；5.DOX+5 g/kg RLM；與空白對照組比較，#P < 0.01；與DOX模型組比較，*P < 0.05；RLM：金櫻子；DOX：阿霉素

圖2 RLM對血清還原型谷胱甘肽含量的影響

2.4 RLM干預對大鼠血清TNF-α含量的影響

空白對照組大鼠血清中TNF-α含量較低，DOX處理后TNF-α顯著增高（P < 0.01）。RLM干預能以劑量依賴性方式降低血清中TNF-α的含量，其中DOX+5 g/kg RLM處理后，TNF-α含量降低最多[（3.49±0.05） pg/mg]，見圖3。

2.5 RLM抑制caspase-3活性

DOX處理后，caspase-3活性增加了近50%。同時經(jīng)1～5 g/kg RLM處理后，caspase-3活性逐漸降至正常水平，其中DOX+5 g/kg RLM處理后，caspase-3活性降低最多（0.83±0.02）。見圖4。

1. 空白對照組；2.DOX模型組；3.DOX+1 g/kg RLM；4.DOX+3 g/kg RLM；5.DOX+5 g/kg RLM；與空白對照組比較，#P < 0.01；與DOX模型組比較，*P < 0.05；RLM：金櫻子；DOX：阿霉素

圖4 RLM對caspase-3活性的影響

3 討論

DOX是一種抗腫瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，對RNA的抑制作用最強，抗瘤譜較廣，對多種腫瘤均有作用，屬周期非特異性藥物，對各種生長周期的腫瘤細胞都有殺滅作用。主要適用于急性白血病，對急性淋巴細胞白血病及粒細胞白血病均有效，一般作為第二線藥物，即在首選藥物耐藥時可考慮應用此藥。惡性淋巴瘤，可作為交替使用的首選藥物。DOX和其他奎寧蒽環(huán)類藥物一樣，主要的毒性反應有：白細胞和血小板減少，60%～80%的患者可發(fā)生；100%的患者有不同程度的毛發(fā)脫落，停藥后可以恢復生長；心臟毒性，表現(xiàn)為心律失常，ST-T改變，多出現(xiàn)在停藥后的1～6個月[7]。本研究通過DOX建立心肌毒性模型發(fā)現(xiàn)，血清AST、LDH和CK-MB顯著增加，這可能是由于DOX損傷心肌細胞膜后，AST、LDH和CK-MB漏出所致。本研究還發(fā)現(xiàn)，DOX還可以導致TC含量增高，這可能是由于DOX導致腎病綜合征所致[8]。RLM屬薔薇科薔薇屬常綠蔓性灌木野生果樹，其果實中總糖含量達24%，其中多糖含量約為金櫻子果實的8.73%。研究顯示，RLM的抗氧化能力與丁基羥基甲苯相當，并能顯著清除超氧陰離子自由基、抑制羥自由基對細胞膜的破壞而引起的溶血和脂質過氧化產(chǎn)物的形成，從而具有顯著的抗氧化作用[9]。此外，RLM金櫻子能減輕糖尿病腎病大鼠的氧化損傷，減少過氧化質，升高抗氧化酶活性，機制可能與干預氧化應激、抑制核因子-κB、TNF-α表達有關。本研究顯示通過RLM灌胃后，大鼠的血清指標得到了顯著的改善[10-13]。同時，本研究還觀察了RLM對氧化應激的影響。結果發(fā)現(xiàn)，DOX能顯著增加心肌中MDA含量，同時顯著降低GSH水平。這可能是DOX導致氧化應激，大量氧自由基的產(chǎn)生導致GSH減少。脂質過氧化導致心肌細胞損傷后引起AST、LDH和CK-MB漏出至循環(huán)系統(tǒng)是由于心臟損傷[14]?？诜LM能明顯降低脂蛋白過氧化物酶而提高GSH，這表明這些藥物能清除自由基和減少細胞損傷。另一方面，氧化應激可激活p38絲裂原激活的蛋白激酶和核因子-κB，從導致TNF-α大量合成，反過來加重氧化應激狀態(tài)而使線粒體膜通透性發(fā)生改變，隨后導致自由基和細胞色素C從線粒體中釋放到細胞質，激活caspase-3而引起凋亡發(fā)生[15-17]。RLM可能通過抑制組織中的應激反應而降低心肌中TNF-α和caspase-3含量。

總之，本研究證實RLM對DOX導致的心肌損傷有保護作用，其機制可能與抗氧化、抗炎和抗凋亡有關。在下一步研究中，筆者將對其分子機制進行進一步探討。

[參考文獻]

[1] Gandhi H，Patel VB，Mistry N，et al. Doxorubicin mediated cardiotoxicity in rats： Protective role of felodipine on cardiac indices [J]. Environ Toxicol Pharmacol，2013，36（3）：787-795.

[2] Gilliam LA，Moylan JS，Patterson EW，et al. Doxorubicin acts via mitochondrial ROS to stimulate catabolism in C2C12 myotubes [J]. Am J Physiol Cell Physiol，2012，302（1）：195-202.

[3] Basu S，Ganguly A，Chakraborty P，et al. Targeting the mitochondrial pathway to induce apoptosis/necrosis through ROS by a newly developed Schiff's base to overcome MDR in cancer [J]. Biochimie，2012，94（1）：166-183.

[4] Uma MB，Shrivastava S，Kuncha M，et al. Ethanolic extract of Boswellia ovalifoliolata bark and leaf attenuates Doxorubicin-induced cardiotoxicity in mice [J]. Environ Toxicol Pharmacol，2013，36（3）：840-849.

[5] Jia Y，Ji L，Zhang S，et al. Total flavonoids from Rosa Laevigata Michx fruit attenuates hydrogen peroxide induced injury in human umbilical vein endothelial cells [J]. Food Chem Toxicol，2012，50（9）：3133-3141.

[6] 趙云濤， 國興明，李付振. 金櫻子多糖的抗氧化作用[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2003，24（4）：35-37.

[7] Fu Z，Guo J，Jing L，et al. Enhanced toxicity and ROS generation by Doxorubicin in primary cultures of cardiomyocytes from neonatal metallothionein-I/II null mice [J]. Toxicol in Vitro，2010，24（6）：1584-1591.

[8] Ai S，Zheng J，Lin Q，et al. Proteomic analysis indicates altered expression of plasma proteins in a rat nephropathy model [J]. Clin Exp Nephrol，2013，17（1）：24-31.

[9] Zhang S，Zheng L，Dong D，et al. Effects of flavonoids from Rosa laevigata Michx fruit against high-fat diet-induced non-alcoholic fatty liver disease in rats[J]. Food Chem，2013，141（3）：2108-2116.

[10] Zhou Y，Liao Q，Luo Y，et al. Renal protective effect of Rosa laevigata Michx. by the inhibition of oxidative stress in streptozotocin-induced diabetic rats [J].Mol Med Rep，2012，5（6）：1548-1554.

[11] 趙海山，趙成建，張歡，等.甘脯酰阿霉素對斑馬魚胚胎的毒性評估[J].中國藥房，2012，23（41）：3882-3884.

[12] 劉煥龍，康寧，李軍霞，等.戊地昔布聯(lián)合阿霉素對人乳腺癌細胞增殖的抑制作用及其機制研究[J].中國藥房，2012，23（29）：2705-2707.

[13] 張祥林，鄭石磊，董福仁，等.鹽酸多西環(huán)素聯(lián)合碘油對兔VX2肝瘤凋亡、增殖及肝功能的影響研究[J].中國藥房，2012，23（33）：3092-3094.

[14] Firdous AP，Kuttan R. Chemo protective activity of carotenoid meso-zeaxanthin against Doxorubicin-induced cardio toxicity [J]. J Exp Ther Oncol，2012，10（2）：101-106.

[15] Alkreathy HM，Damanhouri ZA，Ahmed N，et al. Mechanisms of cardioprotective effect of aged garlic extract against Doxorubicin-induced cardiotoxicity[J]. Integr Cancer Ther，2012，11（4）：364-370.

[16] 阿迪拉·阿扎提，趙龍，張玲，等.心肌細胞/膠原復合體移植心梗大鼠梗死周邊區(qū)的電偶聯(lián)網(wǎng)絡變化[J].中國實驗動物學報，2013，21（1）：75-79.

篇7

摘 要：2013年開展了網(wǎng)具作業(yè)性能的研究，對網(wǎng)具進行了海上測試和模型試驗，初步確定了圍網(wǎng)網(wǎng)具調整方案；開展了金槍魚圍網(wǎng)數(shù)值模擬研究，并取得一定的成果；初步完成了人工集魚裝置和集群效果分析和自由群捕獲成功率的研究；完成了GPS浮標系統(tǒng)方案的制定和原理圖設計，進行了論證性試驗與各種數(shù)據(jù)的采集；通過海上調查與試驗研究，開發(fā)高效生態(tài)型金槍魚延繩釣漁具漁法，提高目標魚種產(chǎn)量，減少非目標物種的誤捕，提高我國金槍魚延繩釣漁業(yè)的捕撈技術，獲得分析報告1份，初步開發(fā)了延繩釣漁具作業(yè)狀態(tài)三維動態(tài)顯示軟件。開展了金槍魚魚肉鮮度和色澤研究，建立了魚肉色澤評定方法的研究，確定了藍鰭金槍魚赤身、中腹、大腹三個部位肌肉解凍后的肉色最佳觀測時間，探尋了色差儀測量魚肉色澤的最優(yōu)測色背景；開展了凍藏條件下（-18 ℃）藍鰭金槍魚三個部位肌肉脂肪氧化和魚肉色澤變化的研究，確定了肉色變化最快的部位，并通過相關性分析，探究了各指標間的相關密切程度，通過研究金槍魚不同加工工藝參數(shù)對產(chǎn)品質量的影響及配套設備的研制、篩選，形成了金槍魚超低溫冷凍加工技術。目前，已發(fā)表（已標注）論文15篇（其中EI和SCI收錄3篇），已接受待4篇，投稿論文6篇；申請發(fā)明專利3項；獲軟件著作權1項。較好地完成了2013年度工作計劃和考核指標。

關鍵詞：金槍魚 圍網(wǎng)捕撈 保鮮 關鍵技術

Abstract：The project has been carried out successfully in 2013.Project group developed a series of studies in relation to operational properties of purse seine，primarily involving in-situ measurement，model experiment and numerical simulation.The research results provided some pertinent suggestions for the modification of present purse seine gear.Preliminary，we established the adjustment plan and acquired a certain achievement.Furthermore，analysis of the effect on gathering fish school by FADs and the rate of fishing success for free school have been accomplished with survey report submitted in the final summary.Based on the survey and experiment at sea，the high efficiency and eco-friendly pelagic longline will be developed to enhance the catch of targeting species and to reduce the by catch of non-targeting species.Finally，the longling technique of China will be improved.The project has been carried out successfully in 2013.The assessment method of tuna meat color was researched and the best observation time for three bluefin parts（the cephalic parts of the dorsal and ventral ordinary muscles， the caudal part of the ventral ordinary muscle）after thawing was confirmed，so did the perfect background for the chromatic meter.the change rule of fat oxidation and meat color for three parts storing at the same freezing temperature（-18 ℃）was carried out and the part which changed most fast was confirmed，and through correlation analysis，the levels of intimacy of each index was studied.Through the research on the effect of diverse tuna processing technology parameters on the quality of the product and developing the corollany equipments，the tuna super-freezing process was established.At present，a total of 15 papers are published（labeled by this research），which include 3 paper published in the journal of EI and SCI.There are 10 submitted papers（including 4 received papers）.We also applied for 3 invention patents.Based on the description，we think we successfully completed the annual working plan and evaluation indicators in 2013.

Key Words：Tuna；Purse seine；Preservation；Key technology

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篇8

關鍵詞：中醫(yī)藥療法；細胞凋亡；Bcl-2；Bax

中圖分類號：It289.5 文獻標識碼：A 文章編號：1673―7717(200r7)11―2327―03

細胞凋亡(Apoptosis)，亦稱程序性細胞死亡，不僅對胚胎發(fā)生、個體發(fā)育和保持機體穩(wěn)定等生物學功能至關重要，而且在調控細胞增殖、腫瘤形成和發(fā)展中也起關鍵作用。凋亡過程的紊亂將導致發(fā)育異常，并加速腫瘤的發(fā)生與惡化。研究表明，幾乎所有的化療藥物均可通過誘導凋亡而發(fā)揮作用，因此，誘導腫瘤細胞凋亡是眾多腫瘤治療方法(如放、化療，生物治療等)的重要藥理學機制和生物學效應之一。中醫(yī)中藥治療腫瘤已有幾千年的歷史，具有獨特的優(yōu)勢，臨床上，復方中藥養(yǎng)陰清熱方一安體優(yōu)I號治療肝癌等腫瘤，取得較好療效。本研究試圖從中藥對HCa―F肝癌荷瘤小鼠的干預作用，模擬中藥體內給藥途徑，探索復方中藥抗腫瘤的機制及作用靶點。

1　材料與方法

1.1　瘤株及實驗動物

肝癌高淋巴道轉移細胞系HCa―F，購自大連醫(yī)科大學病理教研室；近交系615小鼠(三級)48只，雌雄各半，體重(20±2)g，購自中國醫(yī)學科學院實驗動物中心。在SPF環(huán)境飼養(yǎng)，按文獻復制模型，無菌條件下抽取荷有HCa―F肝癌的615小鼠癌性腹水，配制成含HCa―F肝癌細胞2×106濃度，活細胞95％以上，再以每只0.2mL細胞懸液接種于615小鼠右腋皮下。

1.2　藥物

養(yǎng)陰清熱方――安體優(yōu)1號(北沙參、天門冬、三葉青、南方紅豆杉等8味)，簡稱ATU―I，生藥材經(jīng)水提取(不含南方紅豆杉)，濃縮分裝；南方紅豆杉以70％乙醇回流提取，按比例加入中藥煎液中，分別簡稱為養(yǎng)陰清熱方低、中、高劑量組，儲于4℃冰箱，臨用時振蕩渾勻。a―IFN(賽若金注射液，500萬U／瓶)，深圳科興生物制品有限公司，(96)衛(wèi)藥準字(圳科興)S-02號，批號030401。紫杉醇針劑(PTX,5mL／30mg瓶)，北京四環(huán)醫(yī)藥科技股份有限公司，(98)衛(wèi)藥準字x-10號，批號021009。

1.3　分組及給藥方法移植24h后，隨機分為6組，每組樣本為8只，分別為空白組(blank組)、陽性藥物1組(干擾素組，簡稱IFN組)、陽性藥物2組(紫杉醇組，簡稱PTX組)、中藥養(yǎng)陰清熱方低劑量組(簡稱ATU-L組)、養(yǎng)陰清熱方中劑量組(簡稱ATU―M組)、養(yǎng)陰清熱方高劑量組(簡稱ATU―H組)。在接種24h后開始給藥，養(yǎng)陰清熱方低、中、高3個劑量組每天每只分別予約0.4mL／日灌胃，連續(xù)21天；陽性藥物1組每只給予a―IFN1×106U／kg?d，左腋皮下注射，每天1次，共用21次；空白組每只給0.4mL生理鹽才(／日灌胃，共21天；陽性藥物2組(PTX組)，參考有關文獻報道，在接種24h后給予1次腹腔注射0.2mL／只紫杉醇(0.4mg／20g)；空白組每只給生理鹽水0.4mL／日灌胃，連續(xù)21天。

1.4　取材

在第22天，用眼球放血法處死全部小鼠，剪開右腋下皮膚，分離出移植瘤組織：取瘸塊邊緣生長良好的瘤組織，大小約0.4cm×0.3cm×0.2cm，置于10％福爾馬林中固定，以備石蠟包埋待用。將待檢腫瘤組織用10％甲醛固定一酒精脫水二，甲苯透明常規(guī)石蠟包埋、常規(guī)組織臘塊4μm連續(xù)切片，貼附于防脫片劑APES處理的潔凈載玻片，置于60℃烤箱烤干備用。

1.5　試劑與實驗方法

即用型SABC免疫組化染色試劑盒(含5％山羊血清封閉液，二抗，SABC等)購自武漢博士德試劑公司，其中―抗bel-2為兔抗鼠多抗，Cat#，554087、bax為兔抗鼠多抗，Cat#554106，均為美國BD公司產(chǎn)品，采用SABC法進行免疫組化染色。

1.6　統(tǒng)計學處理

采用SPSS12.0軟件包統(tǒng)計，率的比較用x2檢驗，當n

2　結果

2.1　結果判定標準Bcl-2、Bax陽性表達，主要定位于細胞漿，設陰性對照組(以PBS替代一抗)和陽性對照，陽性結果根據(jù)Gataliea半定量方法，按免疫組化切片中腫瘤染色強度分為4級：A級為細胞漿或包膜無染色，O分(O)；B級為細胞漿或細胞膜呈淺黃色，1分(+)；C級為細胞漿呈黃色顆粒狀，2分(++)；D級為細胞漿呈均深黃色，3分(+++)。計算每張切片中腫瘤細胞染色深淺(A、B、C、D)各占的百分數(shù)8、b、c、d，然后計算組織學評分(H)，H=A×a+B×b+C×c+D×d，以得O分(－)，1分(+)為陰性，及2分(++)為低表達，得3分(+++)為高表達。

2.2　養(yǎng)陰清熱方對小鼠HCa-F肝癌皮下移植瘤Bcl-2表達的影響在HCa-F肝癌皮下移植瘤，BcI-2陽性細胞，主要定位于胞漿，Bcl-2免疫組化檢測，見表1，結果顯示，ATU―H組和IFN組的高表達率僅為12.5％，均與空白組(高表達率為87.5％)及ATU―L組的75％高表達率差異顯著，均P0.05。而其它各組問的比較，均無明顯差異，p>0.05。

2.3　養(yǎng)陰清熱方對小鼠HCa―F肝癌皮下移植瘤Bax表達的影響

在HCa―F肝癌皮下移植瘤，Bax陽性細胞，主要定位于胞漿，Baz免疫組化檢測，見表2，結果顯示：ATU―H組和IFN組的高表達率分別為62.5％、50％，高于其它各組，與空白組及ATU―L(高表達率為0％)比較，均具有統(tǒng)計學差異，P0.05。而PTX組及ATU―M組的高表達率

分別為37.5％和25％，均低于ATU―H組及IFN組，高于空白組和ATU―L組，但與其它各組間比較，均無顯著差異，P>0.05。

3　討論

細胞凋亡(Apoptosis)，亦稱程序性細胞死亡(Pro-grammcd cell death，PCD)，是細胞接受外界信號刺激后，由凋亡相關基因IB3、C―myc、Bcl―2／Bax、Fas／FasL等自由控制發(fā)生的有序性細胞死亡過程，并伴有其獨特的形態(tài)學特征――凋亡小體的形成和DNA降解片斷的產(chǎn)生。而細胞接受凋亡信號后傳導人細胞的過程，亦十分復雜，涉及腫瘤壞死因子受體、(TNFR)家族、ICE(白介素―1β―轉換酶)蛋白酶家族、絲裂酶原激活的蛋白酶系統(tǒng)等。目前認為細胞凋亡的發(fā)生主要通過Fas／FasL依賴和非Fas／FasL的依賴信號傳導途徑，而誘導凋亡。Fas／FasL屬于腫瘤壞死因子(INF)受體和神經(jīng)生長因子(NGF)受體的超家族成員，是存在于細胞表面的跨膜蛋白，其中FasL，即Fas Lig-and，是一種Ⅱ型膜蛋白，分子量為40KD，屬TNF家族，F(xiàn)asL主要在活化的T淋巴細胞和NK細胞中表達；而Fas是一種糖基化跨膜蛋白分子，屬于TNF和NGF受體家族。FasL與Fas結合后，向Fas(+)細胞傳遞死亡信號，觸發(fā)ICE級鏈反應，不同Caspase的參與等，從而引起Fas(+)細胞凋亡。

凋亡相關基因bcl―2，是第一個被發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制基因，屬原癌基因，編碼分子量為26KD的跨膜蛋白，能抑制多種因素引起的凋亡，有較多同原基因：bax、bad、BHRFI、bcl―x、mcl―l等，構成了bcl―2家族。研究發(fā)現(xiàn)，Bcl―2蛋白在核膜、內質網(wǎng)和線粒體外膜呈斑片狀分布。通常bcl―2家族成員內部間以二聚體的形式發(fā)揮作用，如bcl―2／bax和bcl―2／bcl―x1均抑制細胞凋亡，而bad／bax、bax／bax、bcl-2／bcl－x5卻可促進凋亡。其中bcl-2與bax互為對方的調控者，相互間的比率及作用決定了細胞是否進入凋亡。Texieria等報道，去除E2培養(yǎng)的人類乳癌細胞系Bcl-2表達下調，而Bax未發(fā)生變化，即Bcl－2／Bax比率下降，細胞凋亡加速，而且對化療藥物的耐藥性也降低。

研究表明，幾乎所有的化療藥物均可通過誘導凋亡而發(fā)揮作用；而放療不僅能殺死腫瘤細胞，控制增殖，還可引起由Fas介導的細胞凋亡，而且在局部組織產(chǎn)生活性氧，進一步誘導腫瘤細胞凋亡。因此，誘導腫瘤細胞凋亡是眾多腫瘤治療方法的重要藥理學機制和生物學效應之一。

許多中藥成分也逐步被證實具有促凋亡作用：蟾酥提取物通過下調凋亡相關基因c―myc、Bcl―2的表達而誘導HL―60、ML―1細胞凋亡；氧化砷誘導人白血病細胞MB4凋亡主要是下調Bcl―2基因表達，使Bcl―2／Bax比值減少；而天然植物紅豆杉的莖皮提取物紫杉醇處理人乳癌細胞和HL―60細胞凋亡時，bcl―2表達呈明顯持續(xù)減低趨勢，并發(fā)生磷酸化反應，同時經(jīng)紫杉醇處理癌細胞一定時間后，bax蛋白呈明顯增加，說明激活了Bax基因而啟動凋亡過程。

篇9

落紅不是無情物 ， 化作春泥更護花。

-----題記

我站在一棵大樹下，看著密密麻麻的一樹樹葉，它們綠得那么可愛，為這棵大樹穿上一件綠油油的衣服。如果沒有這些樹葉，這棵樹又會怎么樣呢/我陷入了沉思。

紅花還需綠葉襯.我知道,當夏天大樹為人們獻出一份陰涼時,人們只會感謝大樹,卻不記得大樹是由一片片樹葉組成的.樹葉的默默奉獻不禁讓我想起祖國的園丁----老師.他們隨風潛入夜,潤物細無聲地教育一代代的學子.當那些學子高中狀元,功成名就時,老師只是在背后默默地替他們高興.

我要把有限的生命投入到無限的為人民服務之中.樹葉生的時候為大樹增添幾分姿色,死的時候仍然不忘記自己的使命----犧牲自己,造福他人.為其他的樹提供養(yǎng)料.樹葉的舍己為人讓我想起郝副營長.為了讓突擊戰(zhàn)獲得成功,他點燃手中的書為戰(zhàn)士們照亮前方的道路,但燈光暴露了自己.他就這樣犧牲了.每當看到燈光,我就想起這位戰(zhàn)友來.

春蠶到死絲方盡,蠟炬成灰淚始干.像樹葉一樣的人還有很多很多......

篇10

田德藝

春天，是萬物復蘇的季節(jié)；春天，是充滿生機的季節(jié)。因此，我渴望春天的到來。

春天，小草頑皮而又機靈地把頭伸出大地母親的懷抱，仰望這湛藍的天空和充滿生機的世界。

春天，小花羞澀地綻開五彩斑斕的笑臉，并四處張望，希望能找到自己的“護花使者”。

春天，大樹被重新賦予了生機，它那深棕色的枝干抽出了嫩綠的枝芽，整個大樹比去年長得更茂盛。

春天，沉睡中的動物蘇醒，它們這里轉轉，那里逛逛，好象要再一次適應這個世界。