仰望大樹(shù)范文
時(shí)間：2023-03-18 20:08:22
導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫(xiě)好一篇仰望大樹(shù)，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。
篇1
每當(dāng)我們感慨大樹(shù)的偉岸，每當(dāng)我們羨慕大樹(shù)的沉穩(wěn)，每當(dāng)我們沉醉在大樹(shù)的綠蔭中，可曾想到，在他仍然是一顆小小的種子時(shí)，經(jīng)歷了多少風(fēng)雨，歷經(jīng)了多少磨難，才能擁有今天的光輝?？稍溃秋柦?jīng)風(fēng)霜的樹(shù)干是如何形成的，它是怎么將自己的根深深埋在地下的。他看見(jiàn)清了人世間的滄桑。
這一天，我站在一棵大樹(shù)面前，抬頭仰望這位老者，我仿佛看見(jiàn)了大樹(shù)這千百年來(lái)的歷程，仿佛看見(jiàn)了他的一生。時(shí)光倒流，回到這棵樹(shù)還是一顆種子的時(shí)候。一顆小小的種子，不知被誰(shuí)給遺棄，掉落在這荒野之中，這片荒涼的地方?jīng)]有其他的生命，除了那顆種子。這只是一片荒地，沒(méi)有充足的水源，沒(méi)有松軟的土壤，唯一有的，就只有過(guò)度的陽(yáng)光。種子會(huì)渴死，這是他的結(jié)局。但這顆種子并沒(méi)有就此屈服，他不要這樣的結(jié)局，他要改變自己的命運(yùn)，他沖破了那層保護(hù)他的表皮，他發(fā)芽了，但這只是他生活的開(kāi)始，為了活下去，他必須加自己的根伸長(zhǎng)，希望那些長(zhǎng)長(zhǎng)的根能找到水源，這并不是件容易的事，這里是荒漠，在荒漠中找水，可以說(shuō)是天方夜譚。幸運(yùn)的是，他成功了，他成功找到一些水，他知道，這些水是不夠它活下去的，他只能繼續(xù)尋找，直到找到充足的水源，它要活下去?？赡苁撬男拍罡袆?dòng)了上天，他真的成功了，漸漸地，這片荒野變成了一塊綠州，到處都是生機(jī)盎然的綠色。漸漸地，這里有了人家，夏天，人們總是在它的樹(shù)蔭下乘涼。
沒(méi)有哪棵樹(shù)是種下去就是大樹(shù)的，只有懂得堅(jiān)持，擁有堅(jiān)定的信念，再付出大量的努力，才能長(zhǎng)成參天大樹(shù)，才能為人世間做出貢獻(xiàn)。樹(shù)的生活亦是如此，人生又何嘗不是如此呢？
篇2
1. 重新調(diào)整養(yǎng)殖網(wǎng)箱的布局
根據(jù)產(chǎn)量計(jì)劃確定養(yǎng)殖網(wǎng)箱的規(guī)模。通過(guò)當(dāng)?shù)卣M織，科技人員闡明養(yǎng)殖網(wǎng)箱合理布局的科學(xué)道理，廣泛動(dòng)員養(yǎng)殖戶(hù)按比例拆減70%的現(xiàn)有網(wǎng)箱，并根據(jù)（NY/T 5061―2002）《無(wú)公害食品 大黃魚(yú)養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范》標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行重新布局。
2. 加強(qiáng)網(wǎng)箱區(qū)環(huán)境的日常保護(hù)
（1）每個(gè)養(yǎng)殖區(qū)網(wǎng)箱連續(xù)養(yǎng)殖兩年后，應(yīng)統(tǒng)一收上擋流裝置及網(wǎng)箱，休養(yǎng)3～6個(gè)月。
（2）根據(jù)放置網(wǎng)箱地點(diǎn)的淺與深，養(yǎng)殖4～5年后，可在預(yù)留的空閑海區(qū)內(nèi)移動(dòng)網(wǎng)箱位置。并對(duì)原網(wǎng)箱點(diǎn)的底質(zhì)進(jìn)行清理，以利底質(zhì)生態(tài)環(huán)境的修復(fù)。
（3）網(wǎng)箱區(qū)的環(huán)境衛(wèi)生：一是“漁排”上的人糞尿等生活污水、廢棄物、殘餌、垃圾、病死魚(yú)、油污等應(yīng)收集上岸進(jìn)行無(wú)害化處理。二是換洗網(wǎng)箱應(yīng)在彩條布箱內(nèi)消毒后沖洗，并把沖洗網(wǎng)箱的污水進(jìn)行收集和處理。三是“漁排”要有防油污設(shè)施。
3. 推廣魚(yú)、貝、藻間養(yǎng)的生態(tài)養(yǎng)殖模式
在留足網(wǎng)箱之間的通道和周邊空間的前提下，采用海水魚(yú)網(wǎng)箱、貝類(lèi)、藻類(lèi)養(yǎng)殖區(qū)間隔布局。貝類(lèi)可濾食水體中懸浮的殘餌顆粒和浮游植物而生長(zhǎng)良好，并使海水變得清潔；藻類(lèi)可吸收魚(yú)類(lèi)和貝類(lèi)排放的氮、磷而生長(zhǎng)良好，且藻類(lèi)光合作用產(chǎn)生的氧，可增加水體中的溶氧量，保證魚(yú)、貝生命活動(dòng)需要，促進(jìn)魚(yú)、貝類(lèi)產(chǎn)生的污染物的氧化，還可生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)貝、藻產(chǎn)品。如此在網(wǎng)箱區(qū)一帶形成一個(gè)互利互補(bǔ)的良性生態(tài)群落，既提高海區(qū)養(yǎng)殖效率，又可以改善海區(qū)生態(tài)環(huán)境。
4. 使用優(yōu)質(zhì)、適口人工配合顆粒飼料并適量投喂
優(yōu)質(zhì)、適口的人工配合顆粒飼料能夠提高飼料利用率，降低餌料系數(shù)，減少殘餌量。應(yīng)以?xún)?yōu)質(zhì)的浮性人工配合飼料代替鮮雜魚(yú)肉投喂，既可保護(hù)水產(chǎn)資源，又可減少殘餌對(duì)網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)的污染。
二、為海水魚(yú)網(wǎng)箱養(yǎng)殖提供種質(zhì)優(yōu)良與體質(zhì)健壯的苗種
1. 苗種的種質(zhì)要求
使用原種或經(jīng)選育的生長(zhǎng)快、個(gè)體大的良種親魚(yú)；改變目前由于濫用小個(gè)體親魚(yú)進(jìn)行近親繁殖，造成海水魚(yú)養(yǎng)殖種類(lèi)個(gè)體小型化、抗病力下降和性成熟提前等種質(zhì)退化現(xiàn)象。
2. 苗種的體質(zhì)要求
推廣低密度生態(tài)式培育，大黃魚(yú)全長(zhǎng)2厘米魚(yú)苗的出苗量宜控制在每立方米5000尾以下（其他海水魚(yú)養(yǎng)殖種類(lèi)還要更低些），做到育苗階段不用藥或少用藥，魚(yú)苗生長(zhǎng)快、活力好、無(wú)病害，成活率高。
網(wǎng)箱養(yǎng)殖的海水魚(yú)魚(yú)種放養(yǎng)密度應(yīng)適當(dāng)，不是密度越大越好。在網(wǎng)箱區(qū)水較深、布局合理、水流暢通和水質(zhì)良好條件下，養(yǎng)殖的大黃魚(yú)可按每平方米單產(chǎn)105公斤或每立方米單產(chǎn)15公斤、成活率90%的計(jì)劃，以及魚(yú)種和養(yǎng)成魚(yú)的規(guī)格來(lái)投放魚(yú)種。
三、病害的防控
目前網(wǎng)箱養(yǎng)殖海水魚(yú)的主要疾病是由病毒性、細(xì)菌性、寄生性、敵害生物、餌料引起的及其他引起的。防治魚(yú)病，應(yīng)以防為主。
1. 苗種檢疫
（1）苗種的調(diào)運(yùn)或投放前要進(jìn)行檢驗(yàn)、檢疫，防止病原體帶入。（2）有病的苗種應(yīng)在原地進(jìn)行治療、處理，痊愈并殺滅了傳染性病原后才能調(diào)運(yùn)與投放，從源頭上切斷病原傳播。
2. 病害防治綜合措施
篇3
大菱鲆屬于蝶型目，鲆科、菱鲆屬，性格溫順。大菱鲆身體有的呈扁平狀，有的近似圓形，雙眼位置在身體左側(cè)，也有部分魚(yú)類(lèi)眼睛左側(cè)部分呈現(xiàn)褐色，帶有圈點(diǎn)狀黑色素及少量皮刺，沒(méi)有眼睛的一側(cè)光滑通常呈白色，頭部和尾鰭都比較小，魚(yú)身部位肉質(zhì)特別肥厚，內(nèi)臟占有的比例很小。因此，也有人叫它“多寶魚(yú)”。此種魚(yú)類(lèi)一般分布于大西洋東側(cè)歐洲沿岸，在北歐南部直至北非北部均是它的繁殖地帶。大菱鲆養(yǎng)殖對(duì)水質(zhì)要求較高，外海水要進(jìn)行過(guò)濾、殺菌，若抽取地下海水可直接入養(yǎng)殖池使用。
2.大菱鲆養(yǎng)殖前的準(zhǔn)備工作
2.1魚(yú)池的選擇。魚(yú)池的面積一般為30m2至60m2為最佳，池深通常在80cm左右即可。養(yǎng)魚(yú)池最好建設(shè)在水質(zhì)優(yōu)良未受到污染還能打出海水井的沿岸地帶和岸段。
2.2水質(zhì)的要求。為保證水質(zhì)，可先用少量魚(yú)苗試養(yǎng)，魚(yú)苗正常時(shí)再進(jìn)行大規(guī)模養(yǎng)殖。地下海水除溫度優(yōu)勢(shì)外，其他各項(xiàng)指標(biāo)均低于自然海水，另外，在殖區(qū)附近水域應(yīng)符合國(guó)家漁業(yè)二級(jí)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，在保證不含有有害重金屬離子和硫化物不超過(guò)0.02mg/ml，以及總大腸桿菌數(shù)小于6000個(gè)/ml，鹽度在20以上的情況下，做到無(wú)污染源，不含泥沙，水質(zhì)清澈。另外，地下海水在進(jìn)入養(yǎng)魚(yú)池之前必須進(jìn)行瀑氣處理。如果大菱鲆長(zhǎng)期生活在不經(jīng)過(guò)瀑氣處理的水環(huán)境中，有害物質(zhì)的長(zhǎng)期積累會(huì)造成魚(yú)體的慢性中毒，或?qū)е卖~(yú)體生長(zhǎng)速度緩慢，體質(zhì)虛弱和成活率降低，嚴(yán)重的時(shí)候容易爆發(fā)魚(yú)病，影響?zhàn)B殖戶(hù)的經(jīng)濟(jì)效益。
2.3光照要求。由于大菱鲆屬于底棲魚(yú)類(lèi)，所以，其光照不能太強(qiáng)和光照時(shí)間太長(zhǎng)，最佳以500Lux至1500Lux為宜。光照節(jié)律要與自然光相同，光線需要柔和、均勻、不刺眼為宜。
2.4鹽度要求。大菱鲆養(yǎng)殖的適應(yīng)鹽度范圍比較寬松，耐受鹽度范圍為12%至40%之間均可，最適宜鹽度為25%至30%。
2.5水溫。大菱鲆是冷水性魚(yú)類(lèi)，耐受溫度的極限范圍在3℃至23℃之間，最佳養(yǎng)殖水溫為15℃至18℃，14℃至19℃水溫條件下生長(zhǎng)較為快速，所以，本文建設(shè)在此溫度下養(yǎng)殖為宜。
2.6pH：養(yǎng)殖水體的pH應(yīng)高于7.3，通常保持在7.6至8.2之間即可。
2.7溶解氧：≥6mg/L。
3.種苗的選購(gòu)及運(yùn)輸管理
3.1在購(gòu)買(mǎi)種苗前，首先要仔細(xì)考察了解育苗場(chǎng)的親魚(yú)種質(zhì)和技術(shù)水平，在選購(gòu)時(shí)應(yīng)盡量選擇大規(guī)格苗種，大規(guī)格種苗對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力較強(qiáng)，養(yǎng)殖成活率高，保證入池養(yǎng)殖的苗種規(guī)格至少達(dá)5cm，達(dá)8cm至10cm規(guī)格的種苗更好。（1）在魚(yú)種選擇時(shí)，應(yīng)選擇體形完整、無(wú)損傷、無(wú)畸形、雙眼位于身體左側(cè)、體色正常、有眼側(cè)呈青褐色、背呈沙色、體表光滑，無(wú)傷痕、無(wú)發(fā)紅癥狀、無(wú)炎癥和寄生蟲(chóng)、在池底受到外界刺激或驚嚇時(shí)能快速游走的苗種為最佳。（2）同一育苗場(chǎng)培育出同一批苗種中規(guī)格較大的苗種推薦選購(gòu)，多批次育苗場(chǎng)多次選購(gòu)回來(lái)的魚(yú)苗，會(huì)出現(xiàn)魚(yú)體大小不一現(xiàn)象，不要選擇在養(yǎng)殖過(guò)程中因各種因素導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢的較小魚(yú)種，該魚(yú)種容易發(fā)育成為"老頭魚(yú)"，給養(yǎng)殖成本帶來(lái)浪費(fèi)。
3.2種苗的運(yùn)輸管理。種苗運(yùn)輸前應(yīng)停食12至24h。通常使用尼龍袋充氧裝運(yùn)，運(yùn)輸時(shí)間最好控制在20h以?xún)?nèi)。首先將袋內(nèi)灌入1/3左右砂濾海水，然后種苗計(jì)數(shù)裝入袋內(nèi)(10L的包裝袋，每袋可裝全長(zhǎng)5cm至10cm的種苗50尾至100尾;全長(zhǎng)15cm的種苗，每袋可裝30尾至50尾。)，然后充氧、封口，將魚(yú)苗袋裝入泡沫箱或紙箱中進(jìn)行運(yùn)輸。在種苗運(yùn)輸過(guò)程中，應(yīng)做好充足的準(zhǔn)備工作，如水溫偏高或運(yùn)輸距離較遠(yuǎn)時(shí)，應(yīng)在運(yùn)輸袋中加入少量冰塊。以免魚(yú)體受傷、碰撞、破袋、漏水、漏氣、氧氣不足等現(xiàn)象發(fā)生。到達(dá)目的地后，在開(kāi)箱、解包入池時(shí)，需先測(cè)試一下溫差和鹽度，最好用15至25ppm土霉素或呋喃西林連續(xù)藥浴3至5天，每天1至2次，每次1h至2h。也可投喂劑量為150至160mg土霉素/kg/天，以增加魚(yú)苗免疫力，提高魚(yú)苗抗病能力。
4.餌料加工與投喂
4.1飼料加工。因大菱鲆是冷水性底棲生活的魚(yú)類(lèi)，活動(dòng)不多，對(duì)蛋白質(zhì)的需求量很高，所以，在飼料原料的選擇上一定要選擇新鮮的雜魚(yú)與飼料配合喂養(yǎng)。通常將50%或60%鮮雜魚(yú)絞成魚(yú)漿，配加上40%或50%大菱鲆專(zhuān)用粉末飼料，再根據(jù)不同的生長(zhǎng)階段添加3%至5%魚(yú)油即可。值得注意的是，鮮雜魚(yú)一定要清洗干凈后方才可加工，堅(jiān)決杜絕使用變質(zhì)、有異味的雜魚(yú)。
4.2餌料的投放。投餌量要根據(jù)魚(yú)平時(shí)攝食情況來(lái)確定，在投餌時(shí)要多意觀察魚(yú)的攝食情況和攝食量變化，投喂原則是不能有殘餌，如果發(fā)現(xiàn)攝食不良現(xiàn)象，應(yīng)及時(shí)找出原因，準(zhǔn)確分析水質(zhì)問(wèn)題以及及時(shí)進(jìn)行對(duì)各種常魚(yú)病的判斷。在魚(yú)體重未達(dá)到100g時(shí)，投餌次數(shù)可在4至6次/天為宜，體重達(dá)到150g以上，每日投餌次數(shù)減少到2或3次/天。盡量避免使用濕性飼料，建議使用專(zhuān)用干性顆粒飼料，干性配合飼料對(duì)水質(zhì)污染輕，有利于減少病害發(fā)生。
篇4
【摘要】
目的：研究大鼠在航天推進(jìn)劑四氧化二氮染毒后多焦視網(wǎng)膜電圖改變。方法：正常雄性Winstar大鼠，用15mg四氧化二氮溶液ip染毒，1h及7d檢查的大鼠為6～10只，在晚上固定時(shí)間進(jìn)行苯巴比妥鈉溶液ip麻醉及多焦視網(wǎng)膜電圖檢查。用Microsoft Excel自帶的統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 結(jié)果：四氧化二氮15mg染毒后1h組的大鼠與正常大鼠的MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期的差異具有顯著意義（P 值0.005~0.034，P ＜0.05)；染毒后7d的大鼠與正常大鼠MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期的差異沒(méi)有顯著意義；兩組染毒大鼠與正常大鼠MERG的總和波及各環(huán)b波的波幅值的差異均無(wú)顯著意義。染毒后1h組與染毒后7d組之間的 MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期的差異其部分指標(biāo)具有顯著意義（P 值0.006～0.017， P ＜0.05），其余部分指標(biāo)的差異無(wú)顯著意義；而兩組之間波幅值的差異無(wú)顯著意義。結(jié)論：1h及7d四氧化二氮染毒大鼠的MERG潛伏期的差異其部分指標(biāo)具有顯著意義，MERG總和波及各環(huán)b波潛伏期有不同程度的差異，其影響隨著時(shí)間延長(zhǎng)而減弱。
【關(guān)鍵詞】 多焦 視網(wǎng)膜電圖 大鼠 四氧化二氮
Features of multifocal electroretinogram of N2O4 injected mice at different time
Abstract AIM: To record multifocal electroretinogram from N2O4 injected mice at different time. In order to provide a found for further study. METHODS: Six to Ten mice which were injected by N2O4 in each group were studied for recording multifocal electroretinogram in the same time in the evening after different time from injected. RESULTS: The latency and amplitude density of b wave of each ring of multifocal electroretinogram was steady. The latency of b wave of each ring of multifocal electroretinogram of each group varies to each other . But the difference of the amplitude of b wave of multifocal electroretinogram of each ring between each group had no significance. CONCLUSION: Recording multifocal electroretinogram of N2O4 injected mice has wide use in science and clinic research.
· KEYWORDS: multifocal electroretinogram; mice; N2O4
0引言
四氧化二氮（N2O4）是軍事及商業(yè)航天器使用的推進(jìn)劑之一，其中毒是航天器事故救護(hù)的一個(gè)重要方面，有關(guān)N2O4中毒的全身救護(hù)的研究已經(jīng)有很多報(bào)道，但是。有關(guān)N2O4中毒的視網(wǎng)膜及視神經(jīng)功能損傷及預(yù)后估計(jì)方面的相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道。多焦視網(wǎng)膜電圖（MERG）是臨床診斷和研究視網(wǎng)膜疾病的重要方法之一。大鼠是比較常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，為了科研及臨床工作的需要，我們研究了N2O4中毒后不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠多焦視網(wǎng)膜電圖改變?nèi)缦隆?/p>
1材料和方法
1.1材料 Ⅱ級(jí)雄性Winstar大鼠(北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體質(zhì)量(200±20)g，暴露于自然光明、暗交替照射及室溫條件下，給予充足清潔飲水、攝食。每晚在固定的時(shí)間進(jìn)行麻醉及視覺(jué)電生理檢查。用不同劑量的N2O4溶液對(duì)大鼠進(jìn)行ip染毒，注射N(xiāo)2O4后，有的動(dòng)物因?yàn)橹卸径劳?，所以每個(gè)劑量實(shí)際檢查的大鼠為6～10只。重慶醫(yī)療設(shè)備有限公司生產(chǎn)的國(guó)特GT2000NV視覺(jué)電生理檢測(cè)儀，配用21英寸彩色顯示器(SAMSUNGSyncMaster1100P)，最大亮度140cd/m2，分辨率640×480，對(duì)比度96%，刷新頻率127Hz。
1.2方法 刺激圖形采用同心圓形刺激圖形，刺激單元數(shù)63個(gè)，最大視角29.7°，第1環(huán)到第5環(huán)面積比為1∶11∶20∶49∶105，各層的視角分別為4.09°，10.79°，15.57°，21.80°，29.75°，變形指數(shù)為1.0，刺激時(shí)亮度140 cd/m2，波形時(shí)間142ms，采樣頻率1kHz。放大器放大倍數(shù)4萬(wàn)，通頻帶1～75Hz，分16個(gè)循環(huán)記錄MERG一級(jí)反應(yīng)，每個(gè)循環(huán)記錄47s。刺激顏色光白光。取暗適應(yīng)2h的大鼠(染毒后1h檢查的大鼠是在暗適應(yīng)期間進(jìn)行ip染毒)，20g/L苯巴比妥鈉溶液7.5mL/kg ip麻醉，麻醉后固定于1個(gè)可以三維移動(dòng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。5g/L托品酰胺散瞳，滴加10g/L甲基纖維素后安放電極，其中記錄電極為自制環(huán)形銀電極，電極固定于大鼠左眼角膜緣處，針灸針改制的參考電極和地極，分別置于被檢眼同側(cè)頰部和尾部皮下。使動(dòng)物的角膜緣平面與熒光屏平行，角膜頂點(diǎn)位于刺激野中心正前方，并且保證與刺激野中心距離為20cm，然后進(jìn)行記錄[1]。對(duì)a波和b波的潛伏期 (ms)、幅值(μV)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。環(huán)形野分為以眼后極部為中心同心排列的5個(gè)環(huán)形，對(duì)b波的潛伏期 (ms)、幅值(μV)的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：使用Microsoft Excel自帶的統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
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2結(jié)果
2.1 MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期 將N2O4染毒的大鼠的MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期與正常大鼠MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期的差異用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，15mg染毒后1h的大鼠與正常大鼠MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期的差異具有顯著意義；而15mg染毒后7d的大鼠與正常大鼠MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期的差異沒(méi)有顯著意義（表1）。
2.2 MERG的波幅值的差異 將染毒后不同時(shí)間的染毒大鼠的MERG的總和波及各環(huán)b波的波幅值與正常大鼠MERG的總和波及各環(huán)b波的波幅值的差異用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ip N2O415mg染毒后1h及15mg染毒后7d的大鼠與正常大鼠MERG的總和波及各環(huán)b波的波幅值的差異均無(wú)顯著意義（表1）。
2.3染毒后不同時(shí)間點(diǎn)的MERG比較 將15mg染毒后1h組及15mg染毒后7d組大鼠的MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期及波幅值的差異用組間差異的t檢驗(yàn)方法進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，15mg染毒后1h組及15mg染毒后7d組之間的 MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期的差異有一半的指標(biāo)其差異有顯著意義，其余的指標(biāo)的差異無(wú)顯著意義；兩組之間波幅值的差異均無(wú)顯著意義（表1）。
3討論
MERG是 1990年前后由Sutter等[2]提出的一種新的電生理檢查技術(shù) ，它是評(píng)價(jià)后極部視網(wǎng)膜以及黃斑區(qū)視功能的比較理想的工具。我們發(fā)現(xiàn)15mg染毒后1h組大鼠及15mg染毒后7d組的大鼠的MERG的總和波及各環(huán)b波的潛伏期的差異具有顯著意義[3]；而兩組之間波幅值的差異無(wú)顯著意義。經(jīng)過(guò)與正常大鼠進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)其對(duì)潛伏期的影響會(huì)隨著時(shí)間延長(zhǎng)而減弱[4]。表明N2O4對(duì)大鼠多焦視網(wǎng)膜電圖的影響主要表現(xiàn)在對(duì)MERG總和波及各環(huán)b波潛伏期的影響方面，而且其影響以染毒早期更為明顯。這些結(jié)果將對(duì)N2O4中毒的救治具有一定的指導(dǎo)意義。為N2O4中毒后引起的視網(wǎng)膜功能損害的防治及進(jìn)一步研究提供了客觀的依據(jù)。
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篇5
【關(guān)鍵詞】 nmda受體亞單位1;細(xì)胞凋亡;阿爾茨海默病;大鼠;海馬
【摘要】 目的 探討n甲基d天門(mén)冬氨酸受體(nmethyldaspartate receptor，nmdar，nr)亞單位1在阿爾茨海默病(ad)樣大鼠海馬的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系。方法 以aβ140和alcl3雙干預(yù)的方法建立ad樣大鼠模型。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)nr1在ad樣大鼠海馬的表達(dá)，tunel法檢測(cè)ad樣大鼠海馬細(xì)胞凋亡情況，并觀察二者的關(guān)系。結(jié)果 nr1在ad樣大鼠海馬各區(qū)的表達(dá)均升高，與對(duì)照組相比有顯著性差異(p<0.05)，區(qū)間比較未見(jiàn)顯著性差異。凋亡陽(yáng)性細(xì)胞在ad樣大鼠海馬各區(qū)均顯著增多尤以ca1區(qū)為甚、其次為齒狀回，與對(duì)照組比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。結(jié)論 nr1在ad樣大鼠海馬表現(xiàn)為病理性的高表達(dá)且這種病理性高表達(dá)和ad樣大鼠海馬的細(xì)胞凋亡以及選擇性易損傷現(xiàn)象之間可能存在著某種特定的關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】 nmda受體亞單位1;細(xì)胞凋亡;阿爾茨海默病;大鼠;海馬
阿爾茨海默病(ad)發(fā)病機(jī)制的β淀粉樣蛋白(aβ)級(jí)聯(lián)反應(yīng)假說(shuō)認(rèn)為，aβ的生成和蓄積是ad發(fā)病的中心環(huán)節(jié)〔1～3〕。氧化損傷，谷氨酸(glu)興奮毒性，老年斑(sp)和神經(jīng)原纖維纏結(jié)(nft)的形成以及細(xì)胞死亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)的激活等，都被視為是繼發(fā)于aβ生成和聚積的后續(xù)事件〔4，5〕。ad可能與活動(dòng)亢進(jìn)的神經(jīng)元有關(guān)，并且這些活動(dòng)亢進(jìn)的神經(jīng)元最密集地集中在病變腦組織中淀粉樣斑塊沉積處的附近并且與疾病的癥狀相關(guān)聯(lián)〔6〕。glu興奮毒性通路在這個(gè)假說(shuō)的數(shù)條主要信號(hào)通路中可能處于極其重要的地位，可能是引發(fā)ad患者神經(jīng)細(xì)胞變性和死亡的一種重要機(jī)制。病理性胞漿ca2+超載主要是由n甲基d天門(mén)冬氨酸受體(nmethyldaspartate receptor，nmdar，nr)所介導(dǎo)，而nr1是ca2+通道的主要調(diào)節(jié)者，是nmdar介導(dǎo)glu興奮毒性的主要組分〔7〕。目前對(duì)ad樣細(xì)胞凋亡的確切機(jī)制仍不明確，至于nr1與ad樣細(xì)胞凋亡的關(guān)系尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本課題應(yīng)用免疫組化和tunel染色的方法，研究nr1在ad樣大鼠海馬的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系。
1 材料與方法
1.1 主要試劑和儀器
aβ140，alcl3(美國(guó) sigma);山羊多克隆抗nr1抗體(美國(guó) santa cruz);總抗山羊igg抗體(英國(guó) abcam);濃縮型二氨基聯(lián)苯胺(dab)試劑盒(北京中杉);原位末端凋亡法(tunel)試劑盒(德國(guó) roche);堿性磷酸酶顯色試劑盒(bcip/nbt，上海碧云天)。sr5r型腦立體定位儀(日本成茂);石蠟切片機(jī)(德國(guó) leica);顯微攝影系統(tǒng)(日本奧林巴斯);圖像分析軟件(美國(guó) media cybernetics)。
1.2 方法
1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
健康雄性老年sd大鼠45只，體重570～620 g，徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：蘇syxk20020038)。實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)訓(xùn)練和篩選后，隨機(jī)分為ad模型組、生理鹽水(ns)組和正常對(duì)照組(nc)，每組15只。
1.2.2 大鼠訓(xùn)練和篩選
所有參與實(shí)驗(yàn)的大鼠用morris水迷宮系統(tǒng)進(jìn)行訓(xùn)練和篩選。4次/d，連續(xù)5 d。將大鼠面向池壁分別從4個(gè)入水點(diǎn)放入水中，記錄其在2 min內(nèi)找到平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)。如果在2 min內(nèi)大鼠未能找到平臺(tái)，則由實(shí)驗(yàn)者將其牽引至平臺(tái)上并讓其停留20 s，再放回籠中，始終不能找到平臺(tái)的大鼠將被剔除。
1.2.3 ad樣大鼠模型制備
模型組大鼠用10%水合氯醛(0.5 ml/100 g)麻醉后，將其固定在鼠腦立體定位儀上，參照文獻(xiàn)〔8〕選取側(cè)腦室立體定位坐標(biāo)(以前囟為參照，旁開(kāi)1.4 mm，后0.8 mm，深3.6 mm)。將微量注射器緩緩插入到定位好的坐標(biāo)，緩慢注射0.5 mg/ml的aβ14030 μl〔aβ140用0.01 mol/l磷酸鹽緩沖液(pbs)配制成0.5 mg/ml的溶液〕，在5 min內(nèi)注射完，留針10 min;然后縫合皮膚并用碘伏消毒。ns組在側(cè)腦室內(nèi)注射等量生理鹽水。單籠飼養(yǎng)直至大鼠完全清醒，晝夜(12/12 h)節(jié)律光照，自由進(jìn)食飲水，室溫控制在20℃～25℃。從第5天開(kāi)始，以100 mg/kg的劑量隔日腹腔注射3% alcl3(ns配置)，持續(xù)4 w。
1.2.4 灌注固定及切片制備
行為學(xué)測(cè)試后，以10%水合氯醛(0.5 ml/100 g體重)腹腔麻醉大鼠，經(jīng)心升主動(dòng)脈插管灌注固定。取包含海馬的腦塊常規(guī)后固定、梯度酒精脫水、二甲苯透明，然后浸蠟、石蠟包埋。取包埋之腦塊作連續(xù)冠狀切片，片厚6 μm;切片分6套，分別進(jìn)行nr1免疫組化、tunel、剛果紅及蘇木素伊紅(he)染色和陰性對(duì)照染色。
1.2.5 免疫組織化學(xué)染色
切片常規(guī)脫蠟、復(fù)水后，入二乙胺乙四酸(edta)抗原修復(fù)液行微波修復(fù)，加3%h2o2(室溫、10 min)，水洗，10%兔血清(室溫1 h)，加一抗(1∶100，以含0.3% triton x100的0.01 mol/l pbs稀釋?zhuān)?℃ 48 h)，水洗，加生物素化兔抗山羊igg(1∶200，37℃ 30 min)，水洗，滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素液(1∶200，37℃ 30 min)，水洗，以dab顯色。陰性對(duì)照以一抗稀釋液替代一抗，其余步驟相同。
1.2.6 tunel反應(yīng)
切片常規(guī)脫蠟、復(fù)水后，入0.01 mol/l檸檬酸鹽緩沖液(ph 6.0)的抗原修復(fù)液行微波修復(fù)，水洗，配置tunel反應(yīng)混合液(tdt∶熒光素標(biāo)記的dutp=1∶9混合，即5 μl tdt + 熒光素標(biāo)記的dutp 45 μl)，加tunel反應(yīng)混合液10 μl(蓋上專(zhuān)用蓋玻片，暗濕盒中反應(yīng)，37℃ 1 h)，水洗，加10 μl converterap(蓋上專(zhuān)用蓋玻片，暗濕盒中反應(yīng)，37℃ 30 min)，水洗，以bcip/nbt顯色。常規(guī)脫水、透明、封片后鏡檢、拍照。陰性對(duì)照以熒光素標(biāo)記的dutp替代tunel反應(yīng)混合液，其余步驟相同。
1.3 圖像分析與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
使用image j圖像分析軟件分別測(cè)量各區(qū)的nr1陽(yáng)性細(xì)胞和凋亡陽(yáng)性細(xì)胞的灰度值，以各測(cè)量點(diǎn)灰度值減去相應(yīng)背景灰度值后的平均值作為海馬各區(qū)的最終灰度值。采用spss16.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以x±s表示。多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用雙因素方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組與對(duì)照組比較采用最小顯著差法。
2 結(jié) 果
2.1 nr1在ad樣大鼠海馬的表達(dá)
nr1免疫組化反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞以胞膜著色為主、呈棕黃色，胞質(zhì)淡然，有時(shí)可見(jiàn)核仁。與nc組和ns組相比，nr1在ad樣大鼠海馬各區(qū)的表達(dá)均顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。與ns組相比，nr1在ad樣大鼠海馬ca1區(qū)、ca3區(qū)和dg區(qū)的增高幅度依次為150.21%、139.75%和136.72%;區(qū)間比較，增高的幅度雖有差異，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖1，圖2。
2.2 ad樣大鼠海馬細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
tunel染色顯示，在ad樣大鼠海馬各區(qū)均可見(jiàn)明顯的凋亡陽(yáng)性細(xì)胞，以ca1區(qū)最為顯著，其次是dg區(qū)，再次是ca3區(qū)。凋亡陽(yáng)性細(xì)胞的胞核呈深藍(lán)色、形態(tài)不規(guī)則，有的固縮、有的裂解。與nc組和ns組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。ns組和nc組雖可見(jiàn)零星的凋亡陽(yáng)性細(xì)胞，但應(yīng)屬于生理現(xiàn)象，且二者比較差異無(wú)顯著性。見(jiàn)圖3，圖4。陰性對(duì)照腦片未見(jiàn)nr1免疫組化反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞和tunel染色陽(yáng)性細(xì)胞。與ad組比較：1)p<0.05，下圖同圖1 大鼠海馬各區(qū)nr1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞灰度值比較( x±s,n=5)圖2 大鼠海馬各區(qū)nr1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞圖片(sabc，×100)圖3 大鼠海馬各區(qū)凋亡陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度的比較(x±s,n=5)圖4 大鼠海馬各區(qū)凋亡陽(yáng)性細(xì)胞染色圖片(tunel，×100)
3 討 論
海馬被認(rèn)為是學(xué)習(xí)記憶的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，海馬功能障礙主要表現(xiàn)為特征性的學(xué)習(xí)和記憶功能的丟失，這與ad患者的主要臨床癥狀和特征相吻合〔9，10〕。因此，本文選擇海馬作為研究對(duì)象。在轉(zhuǎn)基因ad動(dòng)物模型和ad患者腦內(nèi)均發(fā)現(xiàn)cjun氨基末端激酶(jnk)信號(hào)通路被激活的證據(jù)，并認(rèn)為這一途徑與aβ沉積有關(guān)〔11〕。細(xì)胞凋亡是ad樣細(xì)胞死亡的主要形式且此類(lèi)細(xì)胞凋亡主要通過(guò)線粒體途徑實(shí)現(xiàn)〔12〕。但目前對(duì)ad樣細(xì)胞凋亡的確切機(jī)制仍不明確，胞漿內(nèi)ca2+含量的增加被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)因素，是激活內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶而降解dna的先決條件〔13，14〕，而病理性胞漿ca2+超載主要是由nmda受體所介導(dǎo)，nr1又是ca2+通道的主要調(diào)節(jié)者，故推測(cè)在ad樣大鼠海馬nr1的表達(dá)和ad樣細(xì)胞凋亡之間可能存在著某種內(nèi)在的聯(lián)系。
研究發(fā)現(xiàn)，nr1在ad樣大鼠海馬呈病理性高表達(dá);同時(shí)tunel染色顯示，在ad樣大鼠海馬可見(jiàn)明顯的凋亡陽(yáng)性細(xì)胞，二者具有一致性。nr1高表達(dá)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制是，aβ和alcl3干預(yù)以后，誘導(dǎo)nr1表達(dá)增高，導(dǎo)致ca2+通道過(guò)度開(kāi)放、胞漿ca2+超載〔15〕。超載的ca2+一方面可能與鈣調(diào)蛋白(cam)結(jié)合、導(dǎo)致鈣調(diào)蛋白激酶ⅱ(camkⅱ)過(guò)度磷酸化，磷酸化的camkⅱ又作用于nr1促進(jìn)其通道的開(kāi)放，從而構(gòu)成正反饋環(huán)路并形成惡性循環(huán);另一方面，超載的ca2+將介導(dǎo)興奮毒性損傷并產(chǎn)生大量的自由基，導(dǎo)致氧化應(yīng)激和氧化損傷，最終通過(guò)線粒體途徑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡〔16〕。nmda受體尤其是和ca2+通道開(kāi)放密切相關(guān)的nr1被認(rèn)為是突觸可塑性以及海馬和皮質(zhì)神經(jīng)元長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(longterm potentiation，ltp)的主要調(diào)控者，而ltp的損害與中樞神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)〔17〕。因此認(rèn)為，nr1的高表達(dá)除了導(dǎo)致細(xì)胞凋亡之外，還有可能通過(guò)影響海馬神經(jīng)元的ltp以及長(zhǎng)時(shí)程抑制(longterm depression，ltd)的功能而導(dǎo)致ad樣大鼠的學(xué)習(xí)和記憶功能障礙。
研究還發(fā)現(xiàn)，nr1在ad樣大鼠海馬表達(dá)的增高幅度依次為ca1區(qū)>ca3區(qū)>dg;tunel染色顯示在ad樣大鼠海馬凋亡陽(yáng)性細(xì)胞以ca1區(qū)為著、其次是dg、再次是ca3區(qū)。其中，nr1的高表達(dá)區(qū)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與ad的腦組織彌漫性病理學(xué)改變和損傷有關(guān)。ca1區(qū)和dg的凋亡陽(yáng)性細(xì)胞比較有差異但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，二者和ca3區(qū)相比皆具有顯著性差異。該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的在ad轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)明顯空間記憶障礙的同時(shí)，海馬ca1區(qū)和齒狀回的ltp受到顯著損傷相一致〔18〕。ca1區(qū)和dg的ltp抑制顯然與其細(xì)胞凋亡有關(guān)。海馬對(duì)ad具有較高的敏感性和高度選擇性，具有ad病變的基本特征，其中ca1區(qū)是海馬結(jié)構(gòu)中與人類(lèi)學(xué)習(xí)記憶關(guān)系最為密切的功能區(qū)，也是ad的選擇性易損區(qū)〔19〕，得到本研究的證實(shí)，而且本研究還為這種選擇性易損傷現(xiàn)象提供了一個(gè)合理的解釋?zhuān)催@種選擇性易損傷可能與nr1的高表達(dá)相關(guān)。同時(shí)本研究還提示，dg很可能是ad樣大鼠海馬的另一個(gè)選擇性易損區(qū)，而ca3區(qū)則具有相對(duì)耐受性〔20〕。該結(jié)論尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，具體原因和機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，在ad樣大鼠海馬nr1的高表達(dá)很可能是誘導(dǎo)大鼠海馬ad樣細(xì)胞凋亡的主要原因。同時(shí)，nr1的高表達(dá)和細(xì)胞凋亡很可能是ad樣大鼠海馬ca1區(qū)和dg選擇性易損傷而ca3區(qū)相對(duì)耐受的一個(gè)重要原因。若在ad早期給予針對(duì)nr1的特異性阻斷劑也許能有效地防止ad樣細(xì)胞凋亡的發(fā)生，從而減緩ad的發(fā)展進(jìn)程并改善患者的學(xué)習(xí)記憶功能。至于nr1高表達(dá)誘導(dǎo)ad樣細(xì)胞凋亡的具體路徑以及ad樣大鼠海馬選擇性易損傷的確切機(jī)制，有待從分子生物學(xué)角度和基因組學(xué)層面做進(jìn)一步深入研究。
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篇6
1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院心胸外科，湖北十堰 442000；
2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市人民醫(yī)院眼科，湖北十堰 442000
[摘要] 目的 觀察金櫻子（Rosa Laevigata Michx，RLM）對(duì)阿霉素（Doxorubicin，DOX）誘導(dǎo)心肌損傷的保護(hù)作用。 方法 Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（8只）、DOX模型組（15只）、RLM和DOX聯(lián)合用藥組（每個(gè)劑量組30只）。空白對(duì)照組僅給予等體積生理鹽水，DOX模型組大鼠用DOX腹腔注射，使其累計(jì)劑量達(dá)15 mg/kg。聯(lián)合用藥組在DOX組基礎(chǔ)上每千克體重分別用1，2和5 g RLM灌胃。處理結(jié)束后，測(cè)量血清中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）、肌酸激酶（creatine kinase，CK-MB）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、總膽固醇（total cholesterol，TC）的含量，同時(shí)采用比色法測(cè)量還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）、丙二醛（myocardial lipid peroxide，MDA）、腫瘤壞死因子α（tumour necrosis factor-alpha，TNF-α）及caspase-3的含量。 結(jié)果 DOX能顯著增高大鼠血清中AST，LDH，CK-MB和TC水平，5 g/L RLM處理能將血清中AST降至（6.73±0.18）U/L，LDH降至（251.34±33.08）U/L，CK-MB降至（53.62±4.45）U/L，TC降至（67.82±9.47）mg/dL，與DOX模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。DOX也降低還原型GSH水平，能增加MDA，TNF-α及caspase-3的含量。而給予RLM處理后，每毫克組織中GSH水平增加至（1.06±0.11）mg/g，MDA降至（0.82±0.14）nmol/mg，TNF-α降至（3.49±0.05）pg/mg，caspase-3 OD值降至（0.83±0.02），與DOX模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 RLM通過(guò)其抗氧化、抗炎癥及抗凋亡機(jī)制發(fā)揮對(duì)DOX誘導(dǎo)的心肌毒性的保護(hù)作用。
[關(guān)鍵詞] 金櫻子；阿霉素；氧化應(yīng)激
[中圖分類(lèi)號(hào)] R965 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）03（a）-0015-04
Antioxidant and antiapoptosis effect of Rosa Laevigata Michx. on Doxorubicin-induced cardiac injury rats
LUO Weimin1 LIU Yuefeng2 LUO Xiangyu1 ZHANG Jun1
1.Department of Cardiothoracic Surgery， the Taihe Hospital of Shiyan Affiliated to Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China； 2.Department of Ophthalmology， the People's Hospital of Shiyan Affiliated to Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China
[Abstract] Objective To evaluate the cardioprotective effects of Rosa Laevigata Michx. （RLM） on DOX-induced heart injury in rats. Methods Wistar rats were randomized divided into control group， Doxorubicin model group and RLM groups. Rats in control group （n=8） were injected by normal saline injection， while the Doxorubicin model group were administrated by intraperitoneal injection （n=15） in a cumulative dose of 15 mg/kg for two weeks. For the RLM groups， 1， 2， 5 g/kg of ALM were given after DOX injection （n=30 in each dose group）. Activities and levels of aspartate transaminase （AST）， creatine phosphokinase isoenzyme （CK-MB）， lactate dehydrogenase （LDH）， total cholesterol （TC） and triglyceride （TG） in serum were detected. The level of reduced glutathione （GSH）， malondialdehyde （MDA）， tumour necrosis factor-alpha （TNF-α） and caspase-3 levels in cardiac tissue were detected by a colorimetric method. Results DOX significant increased the AST， CK-MB， LDH， and TC level in serum. 5 g/L RLM treatment could decrease AST to （6.73±0.18） U/L， LDH to （251.34±33.08） U/L， CK-MB to （53.62±4.45） U/L， TC to （67.82±9.47） mg/dL， there were statistical significances as compared with those in DOX modec group （P < 0.05）. DOX could also decrease the reduced GSH， and accumulation of MDA， TNF-α and caspase-3. After treatment with RLM， the content of GSH in each milligram of protein increased to （1.06±0.11） mg/g， MDA decreased to （0.82±0.14） nmol/mg， TNF-α decreased to （3.49±0.05） pg/mg， and decreased the OD value of caspase-3 OD to （0.83±0.02）. There were statistical significances as compared with those in DOX group （P < 0.05）. Conclusion RLM mediates their protective effect against DOX-induced cardiac injury through antioxidant， anti-inflammatory and antiapoptotic mechanisms.
[Key words] Rosa Laevigata Michx.； Doxorubicin； Oxidative stress
[基金項(xiàng)目] 湖北省十堰市科學(xué)技術(shù)研究與開(kāi)發(fā)計(jì)劃（指導(dǎo)）項(xiàng)目（Ⅱ）（編號(hào)2009S48）。
[作者簡(jiǎn)介] 羅衛(wèi)民（1978.3-），男，湖北十堰人，碩士；研究方向：心肌保護(hù)。
通訊作者
阿霉素（Doxorubicin，DOX） 是一種廣泛應(yīng)用于腫瘤治療的蒽環(huán)類(lèi)抗生素。盡管其對(duì)包括白血病在內(nèi)的多種惡性腫瘤具有抑制作用，但其蓄積性不可逆性心肌病以及充血性心衰限制了其使用[1]。DOX導(dǎo)致的毒性心肌病原因很多，其中活性氧（reactive oxygen species，ROS）介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡是其重要機(jī)制之一[2]。因此，在DOX治療的同時(shí)預(yù)防性使用抗氧化藥物干預(yù)，有望降低其副作用[3]。近年來(lái)，某些藥用植物在心血管疾病的預(yù)防過(guò)程中具有一定的預(yù)防作用[4]，金櫻子為薔薇科金櫻子（Rosa Laevigata Michx.，RLM）的果實(shí)，研究發(fā)現(xiàn)它具有強(qiáng)大的抗氧化和清除自由基能力[5-6]。本研究旨在觀察RLM對(duì)DOX誘發(fā)的心臟毒性的保護(hù)作用。
1 材料與方法
1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
DOX購(gòu)自意大利Pharmacia公司（批號(hào)：8NB002-A），血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Quimica Clinica Aplicada。血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）和肌酸激酶（creatine kinase，CK-MB）試劑盒為Stanbio產(chǎn)品。還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）及丙二醛（myocardial lipid peroxide，MDA）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物技術(shù)研究所。心肌腫瘤壞死因子α（tumour necrosis factor-alpha，TNF-α）ELISA試劑盒和caspase-3的比色測(cè)定試劑盒購(gòu)自Quantikine。分析純?cè)噭┲饕?gòu)自Sigma-Aldrich公司。
金櫻子購(gòu)于十堰市中草藥材公司，經(jīng)去籽后用煎藥機(jī)進(jìn)行熬煎。金櫻子的鑒定由湖北醫(yī)藥學(xué)院肖勝全教授完成，其提取液濃度為2.0 g/mL。
1.2 實(shí)驗(yàn)分組
成年雄性Wistar大鼠由湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供，體重（250±5）g，在SPF環(huán)境下給予標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室的水和食物飼養(yǎng)2周。大鼠隨機(jī)分成5組：空白對(duì)照組（8只），大鼠接受等體積的生理鹽水作為陰性對(duì)照；DOX模型組（15只），大鼠連續(xù)兩周每間隔48 h注射DOX（2.5 mg/kg，ip）共6次，使其累積劑量達(dá)15 mg/kg。RLM高、中、低劑量組（每組各30只）：在DOX模型組的基礎(chǔ)上，大鼠每日給予RLM（1、2、5 g/kg）灌胃，DOX停止后，持續(xù)RLM灌胃4周。
1.3 血清及心肌組織的獲取
大鼠處理結(jié)束后，獲取血液標(biāo)本，8000×g離心10 min獲取血清用于測(cè)定TC、AST、LDH和CK-MB。隨后解剖大鼠，分離心臟，生理鹽水漂洗2次。將心臟組織剪切，制備成20%的勻漿后，二喹啉甲酸法測(cè)定其總蛋白濃度及AST、LDH、CK-MB活性、TC水平（mg/dL）。
1.4 心肌MDA測(cè)定
心臟勻漿與等體積2.3%的KCl混合，600×g，4℃離心15 min，獲取上清用于測(cè)定MDA。其原理基于脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物與硫代巴比妥酸發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，生成粉紅色的有色絡(luò)合物，從而用分光光度計(jì)以四甲氧基丙烷為標(biāo)準(zhǔn)品，532 nm和520 nm波長(zhǎng)處測(cè)量其OD值。結(jié)果用nmol/mg表示。
1.5 心肌GSH測(cè)定
將等體積的心臟勻漿和預(yù)冷7.5%5-磺酸基水楊酸緩沖液以沉淀蛋白。隨后4℃，600×g離心10 min，獲取上清用于測(cè)量還原型GSH。其原理基于還原型GSH能與5，5-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）反應(yīng)，產(chǎn)物在421 nm波長(zhǎng)處能形成最大吸收峰。含量用mg/g組織表示。
1.6 TNF-α和caspase-3測(cè)定
50 mg心肌組織加入0.8 mL pH 7.4的裂解緩沖液中制成勻漿，10 000×g，4℃離心15 min。獲取上清用于TNF-α和caspase-3測(cè)定。其中TNF-α根據(jù)試劑盒提供的步驟進(jìn)行，采用固相夾心ELISA法，四甲基聯(lián)苯胺（TMB）法顯色并于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)量其吸光度，用pg/mg蛋白表示。采用間接法測(cè)定caspase-3活性，基于caspase-3切除底物分子DEVD-pNA中的發(fā)光基團(tuán)pNA，隨后在405 nm處用測(cè)量其吸光度，用OD值表示，從而間接反應(yīng)其活性。
1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，并采用單因素方差分析數(shù)據(jù)，行t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 各組大鼠血生化指標(biāo)情況
心臟功能和血脂參數(shù)顯示，DOX注射后，血清AST、LDH、CK-MB、TC水平顯著增高。而同時(shí)給予RLM干預(yù)后，這些參數(shù)隨著RLM濃度的增高而不斷改善，見(jiàn)表1。
表1 不同濃度金櫻子處理對(duì)阿霉素心肌損傷大鼠
血生化指標(biāo)的影響（x±s）
注：與空白對(duì)照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01；與DOX模型組比較，#P < 0.05；AST：血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶；LDH：乳酸脫氫酶；TC：血清總膽固醇；CK-MB：肌酸激酶；RLM：金櫻子；DOX：阿霉素
2.2 不同濃度RLM對(duì)心肌DOX處理后MDA含量的影響
與空白對(duì)照組相比，DOX處理組能誘導(dǎo)心肌MDA明顯增加（P < 0.01），給予不同濃度RLM處理后，心肌MDA含量隨之降低，其中DOX+5 g/kg RLM處理后，MDA含量降低最多[（0.82±0.14） nmol/mg]。見(jiàn)圖1。
1.空白對(duì)照組；2.DOX模型組；3.DOX+1 g/kg RLM；4.DOX+3 g/kg RLM；5.DOX+5 g/kg RLM；與空白對(duì)照組比較，#P < 0.01；與DOX模型組比較，*P < 0.05；RLM：金櫻子；DOX：阿霉素
圖1 RLM對(duì)血清丙二醛含量的影響
2.3 不同濃度RLM對(duì)DOX心肌毒性大鼠GSH含量的影響
與空白對(duì)照組相比，DOX組大鼠血清總GSH含量顯著降低（P < 0.01）。而同時(shí)給予不同濃度RLM處理后，GSH含量隨之升高。5 g/kg RLM處理大鼠后，GSH含量[（1.06±0.11） pg/g]接近對(duì)照組水平（圖2）。
1.空白對(duì)照組；2.DOX模型組；3.DOX+1 g/kg RLM；4.DOX+3 g/kg RLM；5.DOX+5 g/kg RLM；與空白對(duì)照組比較，#P < 0.01；與DOX模型組比較，*P < 0.05；RLM：金櫻子；DOX：阿霉素
圖2 RLM對(duì)血清還原型谷胱甘肽含量的影響
2.4 RLM干預(yù)對(duì)大鼠血清TNF-α含量的影響
空白對(duì)照組大鼠血清中TNF-α含量較低，DOX處理后TNF-α顯著增高（P < 0.01）。RLM干預(yù)能以劑量依賴(lài)性方式降低血清中TNF-α的含量，其中DOX+5 g/kg RLM處理后，TNF-α含量降低最多[（3.49±0.05） pg/mg]，見(jiàn)圖3。
2.5 RLM抑制caspase-3活性
DOX處理后，caspase-3活性增加了近50%。同時(shí)經(jīng)1～5 g/kg RLM處理后，caspase-3活性逐漸降至正常水平，其中DOX+5 g/kg RLM處理后，caspase-3活性降低最多（0.83±0.02）。見(jiàn)圖4。
1. 空白對(duì)照組；2.DOX模型組；3.DOX+1 g/kg RLM；4.DOX+3 g/kg RLM；5.DOX+5 g/kg RLM；與空白對(duì)照組比較，#P < 0.01；與DOX模型組比較，*P < 0.05；RLM：金櫻子；DOX：阿霉素
圖4 RLM對(duì)caspase-3活性的影響
3 討論
DOX是一種抗腫瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，對(duì)RNA的抑制作用最強(qiáng)，抗瘤譜較廣，對(duì)多種腫瘤均有作用，屬周期非特異性藥物，對(duì)各種生長(zhǎng)周期的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用。主要適用于急性白血病，對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病及粒細(xì)胞白血病均有效，一般作為第二線藥物，即在首選藥物耐藥時(shí)可考慮應(yīng)用此藥。惡性淋巴瘤，可作為交替使用的首選藥物。DOX和其他奎寧蒽環(huán)類(lèi)藥物一樣，主要的毒性反應(yīng)有：白細(xì)胞和血小板減少，60%～80%的患者可發(fā)生；100%的患者有不同程度的毛發(fā)脫落，停藥后可以恢復(fù)生長(zhǎng)；心臟毒性，表現(xiàn)為心律失常，ST-T改變，多出現(xiàn)在停藥后的1～6個(gè)月[7]。本研究通過(guò)DOX建立心肌毒性模型發(fā)現(xiàn)，血清AST、LDH和CK-MB顯著增加，這可能是由于DOX損傷心肌細(xì)胞膜后，AST、LDH和CK-MB漏出所致。本研究還發(fā)現(xiàn)，DOX還可以導(dǎo)致TC含量增高，這可能是由于DOX導(dǎo)致腎病綜合征所致[8]。RLM屬薔薇科薔薇屬常綠蔓性灌木野生果樹(shù)，其果實(shí)中總糖含量達(dá)24%，其中多糖含量約為金櫻子果實(shí)的8.73%。研究顯示，RLM的抗氧化能力與丁基羥基甲苯相當(dāng)，并能顯著清除超氧陰離子自由基、抑制羥自由基對(duì)細(xì)胞膜的破壞而引起的溶血和脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的形成，從而具有顯著的抗氧化作用[9]。此外，RLM金櫻子能減輕糖尿病腎病大鼠的氧化損傷，減少過(guò)氧化質(zhì)，升高抗氧化酶活性，機(jī)制可能與干預(yù)氧化應(yīng)激、抑制核因子-κB、TNF-α表達(dá)有關(guān)。本研究顯示通過(guò)RLM灌胃后，大鼠的血清指標(biāo)得到了顯著的改善[10-13]。同時(shí)，本研究還觀察了RLM對(duì)氧化應(yīng)激的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DOX能顯著增加心肌中MDA含量，同時(shí)顯著降低GSH水平。這可能是DOX導(dǎo)致氧化應(yīng)激，大量氧自由基的產(chǎn)生導(dǎo)致GSH減少。脂質(zhì)過(guò)氧化導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷后引起AST、LDH和CK-MB漏出至循環(huán)系統(tǒng)是由于心臟損傷[14]?？诜LM能明顯降低脂蛋白過(guò)氧化物酶而提高GSH，這表明這些藥物能清除自由基和減少細(xì)胞損傷。另一方面，氧化應(yīng)激可激活p38絲裂原激活的蛋白激酶和核因子-κB，從導(dǎo)致TNF-α大量合成，反過(guò)來(lái)加重氧化應(yīng)激狀態(tài)而使線粒體膜通透性發(fā)生改變，隨后導(dǎo)致自由基和細(xì)胞色素C從線粒體中釋放到細(xì)胞質(zhì)，激活caspase-3而引起凋亡發(fā)生[15-17]。RLM可能通過(guò)抑制組織中的應(yīng)激反應(yīng)而降低心肌中TNF-α和caspase-3含量。
總之，本研究證實(shí)RLM對(duì)DOX導(dǎo)致的心肌損傷有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抗氧化、抗炎和抗凋亡有關(guān)。在下一步研究中，筆者將對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探討。
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篇7
摘 要：2013年開(kāi)展了網(wǎng)具作業(yè)性能的研究，對(duì)網(wǎng)具進(jìn)行了海上測(cè)試和模型試驗(yàn)，初步確定了圍網(wǎng)網(wǎng)具調(diào)整方案；開(kāi)展了金槍魚(yú)圍網(wǎng)數(shù)值模擬研究，并取得一定的成果；初步完成了人工集魚(yú)裝置和集群效果分析和自由群捕獲成功率的研究；完成了GPS浮標(biāo)系統(tǒng)方案的制定和原理圖設(shè)計(jì)，進(jìn)行了論證性試驗(yàn)與各種數(shù)據(jù)的采集；通過(guò)海上調(diào)查與試驗(yàn)研究，開(kāi)發(fā)高效生態(tài)型金槍魚(yú)延繩釣漁具漁法，提高目標(biāo)魚(yú)種產(chǎn)量，減少非目標(biāo)物種的誤捕，提高我國(guó)金槍魚(yú)延繩釣漁業(yè)的捕撈技術(shù)，獲得分析報(bào)告1份，初步開(kāi)發(fā)了延繩釣漁具作業(yè)狀態(tài)三維動(dòng)態(tài)顯示軟件。開(kāi)展了金槍魚(yú)魚(yú)肉鮮度和色澤研究，建立了魚(yú)肉色澤評(píng)定方法的研究，確定了藍(lán)鰭金槍魚(yú)赤身、中腹、大腹三個(gè)部位肌肉解凍后的肉色最佳觀測(cè)時(shí)間，探尋了色差儀測(cè)量魚(yú)肉色澤的最優(yōu)測(cè)色背景；開(kāi)展了凍藏條件下（-18 ℃）藍(lán)鰭金槍魚(yú)三個(gè)部位肌肉脂肪氧化和魚(yú)肉色澤變化的研究，確定了肉色變化最快的部位，并通過(guò)相關(guān)性分析，探究了各指標(biāo)間的相關(guān)密切程度，通過(guò)研究金槍魚(yú)不同加工工藝參數(shù)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響及配套設(shè)備的研制、篩選，形成了金槍魚(yú)超低溫冷凍加工技術(shù)。目前，已發(fā)表（已標(biāo)注）論文15篇（其中EI和SCI收錄3篇），已接受待4篇，投稿論文6篇；申請(qǐng)發(fā)明專(zhuān)利3項(xiàng)；獲軟件著作權(quán)1項(xiàng)。較好地完成了2013年度工作計(jì)劃和考核指標(biāo)。
關(guān)鍵詞：金槍魚(yú) 圍網(wǎng)捕撈 保鮮 關(guān)鍵技術(shù)
Abstract：The project has been carried out successfully in 2013.Project group developed a series of studies in relation to operational properties of purse seine，primarily involving in-situ measurement，model experiment and numerical simulation.The research results provided some pertinent suggestions for the modification of present purse seine gear.Preliminary，we established the adjustment plan and acquired a certain achievement.Furthermore，analysis of the effect on gathering fish school by FADs and the rate of fishing success for free school have been accomplished with survey report submitted in the final summary.Based on the survey and experiment at sea，the high efficiency and eco-friendly pelagic longline will be developed to enhance the catch of targeting species and to reduce the by catch of non-targeting species.Finally，the longling technique of China will be improved.The project has been carried out successfully in 2013.The assessment method of tuna meat color was researched and the best observation time for three bluefin parts（the cephalic parts of the dorsal and ventral ordinary muscles， the caudal part of the ventral ordinary muscle）after thawing was confirmed，so did the perfect background for the chromatic meter.the change rule of fat oxidation and meat color for three parts storing at the same freezing temperature（-18 ℃）was carried out and the part which changed most fast was confirmed，and through correlation analysis，the levels of intimacy of each index was studied.Through the research on the effect of diverse tuna processing technology parameters on the quality of the product and developing the corollany equipments，the tuna super-freezing process was established.At present，a total of 15 papers are published（labeled by this research），which include 3 paper published in the journal of EI and SCI.There are 10 submitted papers（including 4 received papers）.We also applied for 3 invention patents.Based on the description，we think we successfully completed the annual working plan and evaluation indicators in 2013.
Key Words：Tuna；Purse seine；Preservation；Key technology
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篇8
關(guān)鍵詞：中醫(yī)藥療法；細(xì)胞凋亡；Bcl-2；Bax
中圖分類(lèi)號(hào)：It289.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673―7717(200r7)11―2327―03
細(xì)胞凋亡(Apoptosis)，亦稱(chēng)程序性細(xì)胞死亡，不僅對(duì)胚胎發(fā)生、個(gè)體發(fā)育和保持機(jī)體穩(wěn)定等生物學(xué)功能至關(guān)重要，而且在調(diào)控細(xì)胞增殖、腫瘤形成和發(fā)展中也起關(guān)鍵作用。凋亡過(guò)程的紊亂將導(dǎo)致發(fā)育異常，并加速腫瘤的發(fā)生與惡化。研究表明，幾乎所有的化療藥物均可通過(guò)誘導(dǎo)凋亡而發(fā)揮作用，因此，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是眾多腫瘤治療方法(如放、化療，生物治療等)的重要藥理學(xué)機(jī)制和生物學(xué)效應(yīng)之一。中醫(yī)中藥治療腫瘤已有幾千年的歷史，具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，臨床上，復(fù)方中藥養(yǎng)陰清熱方一安體優(yōu)I號(hào)治療肝癌等腫瘤，取得較好療效。本研究試圖從中藥對(duì)HCa―F肝癌荷瘤小鼠的干預(yù)作用，模擬中藥體內(nèi)給藥途徑，探索復(fù)方中藥抗腫瘤的機(jī)制及作用靶點(diǎn)。
1 材料與方法
1.1 瘤株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
肝癌高淋巴道轉(zhuǎn)移細(xì)胞系HCa―F，購(gòu)自大連醫(yī)科大學(xué)病理教研室；近交系615小鼠(三級(jí))48只，雌雄各半，體重(20±2)g，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。在SPF環(huán)境飼養(yǎng)，按文獻(xiàn)復(fù)制模型，無(wú)菌條件下抽取荷有HCa―F肝癌的615小鼠癌性腹水，配制成含HCa―F肝癌細(xì)胞2×106濃度，活細(xì)胞95％以上，再以每只0.2mL細(xì)胞懸液接種于615小鼠右腋皮下。
1.2 藥物
養(yǎng)陰清熱方――安體優(yōu)1號(hào)(北沙參、天門(mén)冬、三葉青、南方紅豆杉等8味)，簡(jiǎn)稱(chēng)ATU―I，生藥材經(jīng)水提取(不含南方紅豆杉)，濃縮分裝；南方紅豆杉以70％乙醇回流提取，按比例加入中藥煎液中，分別簡(jiǎn)稱(chēng)為養(yǎng)陰清熱方低、中、高劑量組，儲(chǔ)于4℃冰箱，臨用時(shí)振蕩渾勻。a―IFN(賽若金注射液，500萬(wàn)U／瓶)，深圳科興生物制品有限公司，(96)衛(wèi)藥準(zhǔn)字(圳科興)S-02號(hào)，批號(hào)030401。紫杉醇針劑(PTX,5mL／30mg瓶)，北京四環(huán)醫(yī)藥科技股份有限公司，(98)衛(wèi)藥準(zhǔn)字x-10號(hào)，批號(hào)021009。
1.3 分組及給藥方法移植24h后，隨機(jī)分為6組，每組樣本為8只，分別為空白組(blank組)、陽(yáng)性藥物1組(干擾素組，簡(jiǎn)稱(chēng)IFN組)、陽(yáng)性藥物2組(紫杉醇組，簡(jiǎn)稱(chēng)PTX組)、中藥養(yǎng)陰清熱方低劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)ATU-L組)、養(yǎng)陰清熱方中劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)ATU―M組)、養(yǎng)陰清熱方高劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)ATU―H組)。在接種24h后開(kāi)始給藥，養(yǎng)陰清熱方低、中、高3個(gè)劑量組每天每只分別予約0.4mL／日灌胃，連續(xù)21天；陽(yáng)性藥物1組每只給予a―IFN1×106U／kg?d，左腋皮下注射，每天1次，共用21次；空白組每只給0.4mL生理鹽才(／日灌胃，共21天；陽(yáng)性藥物2組(PTX組)，參考有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，在接種24h后給予1次腹腔注射0.2mL／只紫杉醇(0.4mg／20g)；空白組每只給生理鹽水0.4mL／日灌胃，連續(xù)21天。
1.4 取材
在第22天，用眼球放血法處死全部小鼠，剪開(kāi)右腋下皮膚，分離出移植瘤組織：取瘸塊邊緣生長(zhǎng)良好的瘤組織，大小約0.4cm×0.3cm×0.2cm，置于10％福爾馬林中固定，以備石蠟包埋待用。將待檢腫瘤組織用10％甲醛固定一酒精脫水二，甲苯透明常規(guī)石蠟包埋、常規(guī)組織臘塊4μm連續(xù)切片，貼附于防脫片劑APES處理的潔凈載玻片，置于60℃烤箱烤干備用。
1.5 試劑與實(shí)驗(yàn)方法
即用型SABC免疫組化染色試劑盒(含5％山羊血清封閉液，二抗，SABC等)購(gòu)自武漢博士德試劑公司，其中―抗bel-2為兔抗鼠多抗，Cat#，554087、bax為兔抗鼠多抗，Cat#554106，均為美國(guó)BD公司產(chǎn)品，采用SABC法進(jìn)行免疫組化染色。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用SPSS12.0軟件包統(tǒng)計(jì)，率的比較用x2檢驗(yàn)，當(dāng)n
2 結(jié)果
2.1 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)Bcl-2、Bax陽(yáng)性表達(dá)，主要定位于細(xì)胞漿，設(shè)陰性對(duì)照組(以PBS替代一抗)和陽(yáng)性對(duì)照，陽(yáng)性結(jié)果根據(jù)Gataliea半定量方法，按免疫組化切片中腫瘤染色強(qiáng)度分為4級(jí)：A級(jí)為細(xì)胞漿或包膜無(wú)染色，O分(O)；B級(jí)為細(xì)胞漿或細(xì)胞膜呈淺黃色，1分(+)；C級(jí)為細(xì)胞漿呈黃色顆粒狀，2分(++)；D級(jí)為細(xì)胞漿呈均深黃色，3分(+++)。計(jì)算每張切片中腫瘤細(xì)胞染色深淺(A、B、C、D)各占的百分?jǐn)?shù)8、b、c、d，然后計(jì)算組織學(xué)評(píng)分(H)，H=A×a+B×b+C×c+D×d，以得O分(－)，1分(+)為陰性，及2分(++)為低表達(dá)，得3分(+++)為高表達(dá)。
2.2 養(yǎng)陰清熱方對(duì)小鼠HCa-F肝癌皮下移植瘤Bcl-2表達(dá)的影響在HCa-F肝癌皮下移植瘤，BcI-2陽(yáng)性細(xì)胞，主要定位于胞漿，Bcl-2免疫組化檢測(cè)，見(jiàn)表1，結(jié)果顯示，ATU―H組和IFN組的高表達(dá)率僅為12.5％，均與空白組(高表達(dá)率為87.5％)及ATU―L組的75％高表達(dá)率差異顯著，均P0.05。而其它各組問(wèn)的比較，均無(wú)明顯差異，p>0.05。
2.3 養(yǎng)陰清熱方對(duì)小鼠HCa―F肝癌皮下移植瘤Bax表達(dá)的影響
在HCa―F肝癌皮下移植瘤，Bax陽(yáng)性細(xì)胞，主要定位于胞漿，Baz免疫組化檢測(cè)，見(jiàn)表2，結(jié)果顯示：ATU―H組和IFN組的高表達(dá)率分別為62.5％、50％，高于其它各組，與空白組及ATU―L(高表達(dá)率為0％)比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P0.05。而PTX組及ATU―M組的高表達(dá)率
分別為37.5％和25％，均低于ATU―H組及IFN組，高于空白組和ATU―L組，但與其它各組間比較，均無(wú)顯著差異，P>0.05。
3 討論
細(xì)胞凋亡(Apoptosis)，亦稱(chēng)程序性細(xì)胞死亡(Pro-grammcd cell death，PCD)，是細(xì)胞接受外界信號(hào)刺激后，由凋亡相關(guān)基因IB3、C―myc、Bcl―2／Bax、Fas／FasL等自由控制發(fā)生的有序性細(xì)胞死亡過(guò)程，并伴有其獨(dú)特的形態(tài)學(xué)特征――凋亡小體的形成和DNA降解片斷的產(chǎn)生。而細(xì)胞接受凋亡信號(hào)后傳導(dǎo)人細(xì)胞的過(guò)程，亦十分復(fù)雜，涉及腫瘤壞死因子受體、(TNFR)家族、ICE(白介素―1β―轉(zhuǎn)換酶)蛋白酶家族、絲裂酶原激活的蛋白酶系統(tǒng)等。目前認(rèn)為細(xì)胞凋亡的發(fā)生主要通過(guò)Fas／FasL依賴(lài)和非Fas／FasL的依賴(lài)信號(hào)傳導(dǎo)途徑，而誘導(dǎo)凋亡。Fas／FasL屬于腫瘤壞死因子(INF)受體和神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)受體的超家族成員，是存在于細(xì)胞表面的跨膜蛋白，其中FasL，即Fas Lig-and，是一種Ⅱ型膜蛋白，分子量為40KD，屬TNF家族，F(xiàn)asL主要在活化的T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞中表達(dá)；而Fas是一種糖基化跨膜蛋白分子，屬于TNF和NGF受體家族。FasL與Fas結(jié)合后，向Fas(+)細(xì)胞傳遞死亡信號(hào)，觸發(fā)ICE級(jí)鏈反應(yīng)，不同Caspase的參與等，從而引起Fas(+)細(xì)胞凋亡。
凋亡相關(guān)基因bcl―2，是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制基因，屬原癌基因，編碼分子量為26KD的跨膜蛋白，能抑制多種因素引起的凋亡，有較多同原基因：bax、bad、BHRFI、bcl―x、mcl―l等，構(gòu)成了bcl―2家族。研究發(fā)現(xiàn)，Bcl―2蛋白在核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體外膜呈斑片狀分布。通常bcl―2家族成員內(nèi)部間以二聚體的形式發(fā)揮作用，如bcl―2／bax和bcl―2／bcl―x1均抑制細(xì)胞凋亡，而bad／bax、bax／bax、bcl-2／bcl－x5卻可促進(jìn)凋亡。其中bcl-2與bax互為對(duì)方的調(diào)控者，相互間的比率及作用決定了細(xì)胞是否進(jìn)入凋亡。Texieria等報(bào)道，去除E2培養(yǎng)的人類(lèi)乳癌細(xì)胞系Bcl-2表達(dá)下調(diào)，而B(niǎo)ax未發(fā)生變化，即Bcl－2／Bax比率下降，細(xì)胞凋亡加速，而且對(duì)化療藥物的耐藥性也降低。
研究表明，幾乎所有的化療藥物均可通過(guò)誘導(dǎo)凋亡而發(fā)揮作用；而放療不僅能殺死腫瘤細(xì)胞，控制增殖，還可引起由Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，而且在局部組織產(chǎn)生活性氧，進(jìn)一步誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。因此，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是眾多腫瘤治療方法的重要藥理學(xué)機(jī)制和生物學(xué)效應(yīng)之一。
許多中藥成分也逐步被證實(shí)具有促凋亡作用：蟾酥提取物通過(guò)下調(diào)凋亡相關(guān)基因c―myc、Bcl―2的表達(dá)而誘導(dǎo)HL―60、ML―1細(xì)胞凋亡；氧化砷誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞MB4凋亡主要是下調(diào)Bcl―2基因表達(dá)，使Bcl―2／Bax比值減少；而天然植物紅豆杉的莖皮提取物紫杉醇處理人乳癌細(xì)胞和HL―60細(xì)胞凋亡時(shí)，bcl―2表達(dá)呈明顯持續(xù)減低趨勢(shì)，并發(fā)生磷酸化反應(yīng)，同時(shí)經(jīng)紫杉醇處理癌細(xì)胞一定時(shí)間后，bax蛋白呈明顯增加，說(shuō)明激活了Bax基因而啟動(dòng)凋亡過(guò)程。
篇9
落紅不是無(wú)情物 ， 化作春泥更護(hù)花。
-----題記
我站在一棵大樹(shù)下，看著密密麻麻的一樹(shù)樹(shù)葉，它們綠得那么可愛(ài)，為這棵大樹(shù)穿上一件綠油油的衣服。如果沒(méi)有這些樹(shù)葉，這棵樹(shù)又會(huì)怎么樣呢/我陷入了沉思。
紅花還需綠葉襯.我知道,當(dāng)夏天大樹(shù)為人們獻(xiàn)出一份陰涼時(shí),人們只會(huì)感謝大樹(shù),卻不記得大樹(shù)是由一片片樹(shù)葉組成的.樹(shù)葉的默默奉獻(xiàn)不禁讓我想起祖國(guó)的園丁----老師.他們隨風(fēng)潛入夜,潤(rùn)物細(xì)無(wú)聲地教育一代代的學(xué)子.當(dāng)那些學(xué)子高中狀元,功成名就時(shí),老師只是在背后默默地替他們高興.
我要把有限的生命投入到無(wú)限的為人民服務(wù)之中.樹(shù)葉生的時(shí)候?yàn)榇髽?shù)增添幾分姿色,死的時(shí)候仍然不忘記自己的使命----犧牲自己,造福他人.為其他的樹(shù)提供養(yǎng)料.樹(shù)葉的舍己為人讓我想起郝副營(yíng)長(zhǎng).為了讓突擊戰(zhàn)獲得成功,他點(diǎn)燃手中的書(shū)為戰(zhàn)士們照亮前方的道路,但燈光暴露了自己.他就這樣犧牲了.每當(dāng)看到燈光,我就想起這位戰(zhàn)友來(lái).
春蠶到死絲方盡,蠟炬成灰淚始干.像樹(shù)葉一樣的人還有很多很多......
篇10
田德藝
春天，是萬(wàn)物復(fù)蘇的季節(jié)；春天，是充滿(mǎn)生機(jī)的季節(jié)。因此，我渴望春天的到來(lái)。
春天，小草頑皮而又機(jī)靈地把頭伸出大地母親的懷抱，仰望這湛藍(lán)的天空和充滿(mǎn)生機(jī)的世界。
春天，小花羞澀地綻開(kāi)五彩斑斕的笑臉，并四處張望，希望能找到自己的“護(hù)花使者”。
春天，大樹(shù)被重新賦予了生機(jī)，它那深棕色的枝干抽出了嫩綠的枝芽，整個(gè)大樹(shù)比去年長(zhǎng)得更茂盛。
春天，沉睡中的動(dòng)物蘇醒，它們這里轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)，那里逛逛，好象要再一次適應(yīng)這個(gè)世界。